3.細胞毒試驗 TC細胞、NK細胞、LAK細胞、TIL細胞對其靶細胞有直接的細胞毒(殺傷)作用。常用的栓測細胞毒效應的方法是51Cr-Na2Cro4鹽水溶液與靶細胞胞混合,于37℃培養(yǎng)1小時左右,51Cr即可進入靶細胞,與胞漿蛋白結(jié)合,洗去游離的51Cr后,即可得到51Cr標記的靶細胞,將待檢細胞毒性的細胞與51Cr標記的靶細胞混合(比例約為50:1或100:1)靶細胞被殺傷越多,釋放到上清液中的液游離的51Cr越多,且不能被其他細胞吸收。用γ射線測量儀檢測上清液中的cpm值,即可計算出待檢細胞殺傷活性的高低。
細胞毒試驗檢測Tc細胞效應功能是否健全,及經(jīng)IgG介導的ADCC效應,或NK細胞在抗腫瘤免疫中的作用是有意義的。
4.混合淋巴細胞的反應(MIR) 是體外研究T細胞的較好的方法,雙向MLR常被用來篩選骨髓移植的供體。來自不同供體的淋巴細胞分別與病人的淋巴細胞混合培養(yǎng)4~5天,在最后8小時摻入51TdR摻入法測T細胞的反應性。或用細胞毒法觀察受刺激的T細胞與活的靶細胞混合(靶細胞來自與刺激細胞相同的個體)如果T細胞受刺激后產(chǎn)生了細胞毒T細胞,可殺死活的細胞,根據(jù)靶細胞釋放51Cr的多少算出T細胞移動抑制因子)和LIF(白細胞移動抑制因子)來評估細胞免疫功能。近年來應用測定IL-2的免疫酶技術(shù),操作簡單,并能定量以取代了MIF和LIF的測定。單個核細胞與分裂原一起培養(yǎng)24小時,然后測定清液中的IL-2活性。在細胞免疫功能缺損時,特別是AIDS病人,IL-2分泌明顯降低。而有些疾病,如多發(fā)性硬化、類風濕關(guān)節(jié)炎、移植排斥反應等病人體內(nèi)血清中IL-2水平升高,表明病人T細胞活性增高。發(fā)生移植排斥反應的病人尿中IL-2也可升高。
也可用酶聯(lián)免疫吸附試驗測定各種體液中活化的T細胞脫落的IL-2受體(CD25),一般來說IL-2的水平和IL-2受體水平是平行的,IL-2和IL-2受體的檢測可用于對某些疾病的監(jiān)測,如移桿排斥、自身免疫病以及接受免疫抑制治療的病人。
對體外培養(yǎng)的細胞進行細胞因子產(chǎn)生能力檢測是檢查細胞培養(yǎng)上清液中細胞因子的生物活性或抗原性,F(xiàn)已可用核酸雜交技術(shù),即從組織中或細胞中提取RNA,與同位素或酶標記的該種細胞因子的cDNA探針作分子雜交試驗,即印跡(dot blotting)或Northern印跡,若查出有某種因子的mRNA存在,即說明該細胞在所處培養(yǎng)條件下有產(chǎn)生某種細胞因子的能力。