細(xì)胞免疫（CMⅠ)是由多種細(xì)胞相互作用的結(jié)果。免疫細(xì)胞間相互作用導(dǎo)致多種細(xì)胞因子的釋放。因此細(xì)胞功能測(cè)定不僅涉及T細(xì)胞的數(shù)量和功能與包括各類因子活性測(cè)定，因此評(píng)價(jià)機(jī)體的細(xì)胞免疫功能不僅程序復(fù)雜，且很難標(biāo)準(zhǔn)化
一、遲發(fā)型過(guò)敏反應(yīng)的體外檢測(cè)方法
皮膚試驗(yàn)和接觸性過(guò)敏的誘發(fā)是檢測(cè)遲發(fā)型過(guò)敏反應(yīng)（DTH)的兩種常用方法。皮膚試驗(yàn)中誘發(fā)對(duì)曾經(jīng)使病人致敏的抗原的再次應(yīng)答，而接觸性過(guò)敏是測(cè)試受者對(duì)從未接觸過(guò)的物質(zhì)發(fā)生致敏的能力。
1．皮膚試驗(yàn) 用皮膚試驗(yàn)診斷DTH，常用的抗原有結(jié)核菌純蛋白衍生物（PPD)、腮腺炎病毒、念珠菌素等，在人類試驗(yàn)時(shí)在前臂皮內(nèi)注射少量可溶性抗原，24～48小后，測(cè)量紅腫硬結(jié)的大小，硬結(jié)直徑大于10mm即被看作為陽(yáng)性。表明受試者對(duì)該病原菌有了一定的細(xì)胞免疫能力，若皮試無(wú)反應(yīng)，可用更高濃度的抗原重復(fù)試驗(yàn)，若仍無(wú)反應(yīng)即為陰性，需排除皮試技術(shù)誤差，也可能受試者從未接觸過(guò)此抗原，也可能由于細(xì)胞免疫功能缺損，或由于細(xì)胞免疫功能缺損，或由于嚴(yán)重感染（麻疹、慢性播散性結(jié)核)造成的無(wú)反應(yīng)性。
2．接觸性過(guò)敏常應(yīng)用低分子量化合物如二硝基氯苯（DNCB)誘生接觸性過(guò)敏�；衔锱c皮膚蛋白質(zhì)結(jié)合而導(dǎo)至DTH反應(yīng)。在動(dòng)物試驗(yàn)時(shí)，初次皮膚上涂抹DNCB后間隔7～10天再激發(fā)刺激，則皮膚出現(xiàn)即為陽(yáng)性。此試驗(yàn)人類已不使用。
二、細(xì)胞免疫的體外檢測(cè)方法
體外檢測(cè)淋巴細(xì)胞的數(shù)量和功能，最易采集的是血標(biāo)本，首先需分離或純化淋巴細(xì)胞，一般使用萄聚糖-泛影葡胺配成比重為1.077的淋巴細(xì)胞分層液，當(dāng)將血液重疊于淋巴細(xì)胞分層液之上離心時(shí)，由于紅細(xì)胞（1.092)、多形核白細(xì)胞（1.090)、淋巴細(xì)胞（1.070)的比重不同而相互分開(kāi)。淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞在血漿和分層液交界處形成一薄層。仔細(xì)分出這一薄層的細(xì)胞，其中淋巴細(xì)胞占80%，單核細(xì)胞占20%，淋巴細(xì)胞中T細(xì)胞占80%，B細(xì)胞占4%～10%，其作為非DT、非B細(xì)胞。
1．T細(xì)胞計(jì)數(shù)
�。�1)E花環(huán)法：人類T細(xì)胞表面有SRBC受體（CD2)能與SRBC結(jié)合形成玫瑰花環(huán)樣結(jié)構(gòu)，將經(jīng)分層液分離現(xiàn)的RBM懸液與SRBC在含有血清的平衡鹽水中混合，經(jīng)37℃培養(yǎng)5～10分鐘放4℃過(guò)夜，取細(xì)胞懸計(jì)數(shù)，外周血淋巴細(xì)胞中約70%～80%淋巴細(xì)胞結(jié)成花環(huán)即為T細(xì)胞。目前此方法已用來(lái)分離T細(xì)胞，而不用做T細(xì)胞計(jì)數(shù)。
�。�2)用單克隆抗體計(jì)數(shù)T細(xì)胞：將人的PBM分成三等份，分別用小鼠抗人CD3、CD4和CD8的單克隆抗體作第一抗體與細(xì)胞結(jié)合，再用FITC標(biāo)記的兔抗小鼠IgG抗體作第二抗體進(jìn)行間接免疫熒光染色，在熒光顯微鏡下或流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果，在PBM中被CD3抗體染上熒光的細(xì)胞稱為CD3+細(xì)胞即總T細(xì)胞。正常人在PBM中T細(xì)胞占70%～80%。正常人的CD4+細(xì)胞和CD8+細(xì)胞之和應(yīng)與CD3+細(xì)胞數(shù)一致。CD4+細(xì)胞與CD8+細(xì)胞的比值正常人約為2/1而艾滋病患者則比值小于1.7。
2．T細(xì)胞活化試驗(yàn) T細(xì)胞能被非特異的物質(zhì)稱為有絲分裂原所激活而向淋巴母細(xì)胞轉(zhuǎn)化。T細(xì)胞轉(zhuǎn)化過(guò)程可伴隨有DNA、RNA、蛋白質(zhì)的合成增加，最圖導(dǎo)致細(xì)胞分裂。在光學(xué)顯微鏡下可計(jì)數(shù)轉(zhuǎn)化后的淋巴細(xì)胞數(shù)，也可用氚標(biāo)記的胸腺嘧啶核苷（3HTdR)摻入正在分裂的淋巴細(xì)胞，用液閃測(cè)定儀檢查摻入正在分裂的淋巴細(xì)胞，用液測(cè)量?jī)x檢查摻入的3H-TdR的多少確定淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率。最近有一種不用同位素，又可用儀器測(cè)量的淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)的檢查法，稱為MTT檢測(cè)法，MTT是一種甲氮唑鹽，它是細(xì)胞線粒體脫氫酶的底物，細(xì)胞內(nèi)的酶可將MTT分解產(chǎn)生藍(lán)黑色甲（fromazan)產(chǎn)物。該產(chǎn)物的多少與活性細(xì)胞數(shù)正相關(guān)。結(jié)果可用酶標(biāo)檢測(cè)儀（595mm)測(cè)量匯豐銀行密度，做為MTT法的檢查指標(biāo)。此法的結(jié)果與3H-TdR摻入法平行，并能反應(yīng)試驗(yàn)中的活細(xì)胞數(shù)（表20-3)。
表20－3 淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)的刺激物
| 分裂原 | T細(xì)胞 | B細(xì)胞 |
| 植物血凝素（PHA) | + | － |
| 刀豆蛋白A（ConA) | + | － |
| 美洲商陸（PWM) | + | + |
| 葡萄球菌蛋白A（SPA) | ±﹡ | + |
| 副傷寒桿B（SPB) | ± | + |
注： PWH主要是T細(xì)胞分裂原，也可通過(guò)刺激T細(xì)胞分泌可溶性因子誘導(dǎo)B細(xì)胞增殖分化；
﹡SPA誘導(dǎo)B細(xì)胞分裂不需要T細(xì)胞協(xié)助，但誘導(dǎo)B細(xì)胞激活抗體分泌細(xì)胞需要T細(xì)胞協(xié)助
