1 試劑
1.www.med126.com1 高氯酸。
1.2 濃硫酸。
1.3 30%過氧化氫。
1.40.04mol /L 鉬酸銨
取鉬酸銨5g,加蒸餾水溶解成100ml。
1.5 還原劑
稱取亞硫酸氫鈉6g,亞硫酸鈉1.2g,1-氨基-2-茶酚磺酸0.1g,加蒸餾水溶解成50ml,置棕色瓶中保存,一周內(nèi)可用。
1.6 磷標(biāo)準(zhǔn)液
精確稱取已干燥至恒重的磷酸二氫鉀439.3mg,加蒸餾水溶解,移入100ml容量瓶中,稀釋至刻度,為貯備液(1mg磷/ml)。精確量取貯備液2ml,于100ml容量瓶中,加蒸餾水稀釋至刻度,為磷標(biāo)準(zhǔn)液(20μg/ml)。
2 操作
2.1 樣品
A群腦膜炎球菌多糖菌苗成品測(cè)磷至少取三支安瓿溶解后混合使用。
精確量取一定體積樣品(含磷4~20μg)于刻度試管中,加4滴濃硫酸(約0.08ml),加熱至炭化,再加2滴高氯酸(約0.06ml),消化至無色澄清,必要時(shí)可加1~2滴30%過氧化氫,但最后必須將過氧化氫除盡。消化后稍置片刻,趁熱另2ml蒸餾水(如冷卻后加水,需再加熱),加0.4ml0quanxiangyun.cn/job/.04mol /L 鉬酸銨,混勻,加0.2ml還原劑,混勻,另蒸餾水至6ml,15~20分鐘后,于820nm波長(zhǎng)比色。
2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線
精確量取磷標(biāo)準(zhǔn)液(20μg /ml)0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml,分別置于刻度試管中,補(bǔ)加蒸餾水至1ml,其余操作同樣品,可得一標(biāo)準(zhǔn)曲線。
3 計(jì)算
從標(biāo)準(zhǔn)曲線查出樣品相當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)液之ml數(shù)A。
樣品磷含量(μg /ml)=A×20/樣品ml數(shù)
核酸含量測(cè)定
取含A群腦膜炎多糖抗原5±1mg /ml溶液,采用紫外分光法于260nm波長(zhǎng)測(cè)定OD值,按E1%1cm=200計(jì)算核酸含量。