本書(shū)僅介紹三種原蟲(chóng)的人工培養(yǎng)。
一、溶組織內(nèi)阿米巴培養(yǎng)。
1.營(yíng)養(yǎng)瓊脂雙相培養(yǎng)基
⑴固體部分:牛肉浸膏3g;蛋白胨5g;瓊脂 15g;液體1000ml(見(jiàn)“液體部分”)。
⑵液體部分:氯化鈉8g;氯化鉀0.2g;氯化鈣0.2g;氯化鎂0.01g;磷酸氫二鈉2g;磷酸二氫鉀0.3g;蒸餾水1000ml。
制備先配液體部分2000ml,氯化鈣與氯化鎂另裝小瓶,高壓滅菌(壓力6.81公斤20分鐘)后冷卻,合并一起,取1000ml配固體部分,經(jīng)沸水浴2~3小時(shí),使完全溶解。若有殘?jiān)捎?層紗布過(guò)濾除去,趁熱將濾液分裝試管,每管5ml,高壓滅菌,形成斜面,quanxiangyun.cn/pharm/冷卻后放冰箱中備用。接種前,每管加液體部分4.5ml和牛血清0.5ml,并加米粉20mg(用大米粉分裝小管,經(jīng)180℃烤箱消毒3次)。
2.洛克氏液雞蛋血清培養(yǎng)基
⑴培基成分:洛克氏液70ml;滅活血清(每管加0.5ml);米粉(每管加20mg);雞蛋4個(gè)。
⑵洛克氏(Locke)液:氯化鈉9g;氯化鈣0.2g;氯化鉀0.4g;碳酸氫鈉0.2g;葡萄糖(壓力3.63公斤15分鐘)2.5g;蒸餾水1000ml。
制備先配洛克氏液1000ml,取雞蛋用肥皂水洗刷凈,以70%酒精洗凈后,破殼將蛋黃、蛋清傾入含70ml洛克氏液的小三角燒瓶?jī)?nèi),加有玻璃珠,充分搖動(dòng)使其內(nèi)含物混合,之后分裝消毒試管內(nèi),每管約5ml,置斜位在70℃下經(jīng)1小時(shí)凝固斜面,翌日再置高壓消毒20分鐘。接種前每管加洛克氏液4.5ml、馬血清0.5ml、米粉20mg。
二、陰道毛滴蟲(chóng)培養(yǎng)
常用肝-胨-糖培養(yǎng)基的培養(yǎng)方法。
1.培養(yǎng)基的配制:15%肝浸液100ml;蛋白胨2g;葡萄糖0.5g。
將以上成分混合,加熱使溶,經(jīng)濾紙過(guò)濾,調(diào)節(jié)pH至5.5~6.0。每管分裝5ml,8磅20分鐘高壓滅菌,冷卻后,置37℃恒溫箱中24小時(shí),證明無(wú)菌后,貯存于冰箱備用。接種前每管加滅能無(wú)菌馬血清1ml,即可用。
15%肝浸液的制備:取;兔肝15g,洗凈,剪碎如小米粒大小,浸入100ml,蒸餾水中,置冰箱過(guò)夜,次日煮沸半小時(shí),用4層紗布過(guò)濾除去渣滓,補(bǔ)充蒸餾水至100ml,即成15%肝浸液。
2.培養(yǎng)方法①以無(wú)菌棉拭從陰道后穹窿處取分泌物,無(wú)菌接種入上述的培養(yǎng)基中;②初次接種和第1、2次轉(zhuǎn)種時(shí),應(yīng)加青霉素5~10萬(wàn)單位/2ml培基;③培養(yǎng)溫度為35~38quanxiangyun.cn/zhuyuan/℃為宜;④pH在5.4~6.8之間。