粘附分子構(gòu)型改變影響細(xì)胞粘附作用

　2.Ca²⁺、Mg²⁺與LFA-1分子活化狀態(tài)的關(guān)系Ca²⁺和Mg²⁺的存在對(duì)LFA-1分子與配體的結(jié)合是必需的，在粘附試驗(yàn)系統(tǒng)中加入金屬離子螯合劑（EDTA或EGTA)去除反應(yīng)系統(tǒng)中的Ca²⁺和Mg²⁺可以完全抑制LFA-1與其配體的結(jié)合。采用單克隆抗體對(duì)LFA-1分子表位的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)Ca²⁺與Mg²⁺與LFA-1分子某些表位的表達(dá)有關(guān)，而這些表位的表達(dá)是LFA-1分子活化構(gòu)型的標(biāo)志。如上述NKI-L16識(shí)別表位的表達(dá)需要有Ca²⁺存在；另外一株單克隆抗體24（McAb24)識(shí)別的表位在LFA-1、Mac-1和gp150、90均有表達(dá)，但依賴Mg²⁺的存在。PMA或抗細(xì)胞表面分子的單克隆抗體作用引起的細(xì)胞凝集有一過性持續(xù)性兩種，一過性的作用在半小時(shí)之內(nèi)消失，而持續(xù)性的作用可維持2小時(shí)以上。這種現(xiàn)象與離子依賴種類有一定的關(guān)系，PMA、NKI-L16、抗CD2和CD44單克隆抗體可以引起持續(xù)性的LFA-1分子的活化，它們的作用只依賴Mg²⁺的存在；而抗CD3、CD43和MHC-Ⅱ類分子的單克隆抗體所引起的凝集是一過性的，它們的作用則依賴Ca²⁺與Mg²⁺的同時(shí)存在。

圖2-11　LFA-1介導(dǎo)細(xì)胞粘附調(diào)節(jié)的模式圖

　　注：抗原與TCR/CD3復(fù)合物結(jié)合后激活磷脂酶c，催化PIP2水解為IP3和DAG，引起LFA-1分子β鏈的磷酸化，使LFA-1分子構(gòu)型發(fā)生變化，提高與配體結(jié)合的親和力。CD3分子的磷酸化引起TCR/CD3復(fù)合物的調(diào)變，導(dǎo)致PKC水平下降，使LFA-1分子β鏈去磷酸化轉(zhuǎn)變?yōu)榉腔罨癄顟B(tài)而產(chǎn)生去粘附作用。

　　3.LFA-1分子構(gòu)型改變的機(jī)理 目前對(duì)于淋巴細(xì)胞活化后導(dǎo)致LFA-1分子構(gòu)型改變的機(jī)制還不十分明了。實(shí)驗(yàn)表明，PMA作用于淋巴細(xì)胞后，通過激活蛋白激酶C（PKC)使LFA-1分子β鏈發(fā)生磷酸化，很可能與LFA-1分子構(gòu)型的改變有關(guān)�？笴D2或CD3單克隆抗體可以通過影響磷酸肌磷酸肌醇代謝途徑導(dǎo)致PKC的激活，但兩種McAb影響淋巴細(xì)胞粘附分子活化的過程是不同的，抗CD2單克隆抗體誘導(dǎo)持久的LFA-1分子活化，而抗CD3單克隆抗體只能誘導(dǎo)短暫的、一過性的LFA-1分子的活化（圖2-11)。這種對(duì)粘附分子表達(dá)的負(fù)反饋調(diào)節(jié)機(jī)制，對(duì)于體細(xì)胞粘附作用的調(diào)節(jié)過程可能有重要的意義。體內(nèi)對(duì)粘附作用的負(fù)調(diào)節(jié)意味著細(xì)胞可以與相互作用的靶細(xì)胞脫離，再作用于其它靶細(xì)胞，從而最大限度地發(fā)揮作用。前面曾提到McAb24識(shí)別的表位表達(dá)在活化狀態(tài)的LFA-1分子，McAb24并不阻斷LFA-1分子和Mac-1分子與配體的結(jié)合，但卻可以明顯抑制單核細(xì)胞向T細(xì)胞的抗原提呈作用、LAK細(xì)胞對(duì)靶細(xì)胞的殺傷作用以及中性粒細(xì)胞的趨化移動(dòng)，這些過程均依賴LFA-1和Mac-1分子與其配體的相互作用。單獨(dú)CD3單克隆抗體只引起一過性的LFA-1分子的活化，而同時(shí)加入McAb24則造成持續(xù)性LFA-1分子的活化，提示McAb24可能阻止LFA-1分子由活化狀態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)榉腔罨癄顟B(tài)。

　�。ǘ�)其它粘附分子構(gòu)型的改變對(duì)粘附作用的影響

　　除LFA-1分子外，在integrin家族中其它一些粘附分子構(gòu)型的改變也可以影響細(xì)胞的粘附能力。PMA、抗CD2或CD3單抗可以誘導(dǎo)或增強(qiáng)淋巴細(xì)胞的VLA-4（CD49d/CD29)、VLA-5（CD49e/CD29)和VLA-6（CD49f/CD29)與其配體（層粘連蛋白或纖粘連蛋白)的粘附作用，提示上述粘附分子可能通過與LFA-1相類似的機(jī)制發(fā)生構(gòu)型變化，導(dǎo)致與配體結(jié)合的親和力升高。Mac-1分子（CD11b/CD18)及血小板糖蛋白GPⅡbⅢa（CD41/CD61)分子在細(xì)胞活化后可以暴露新的表位，是其分子構(gòu)型發(fā)生改變的直接證據(jù)，但其發(fā)生機(jī)制目前還不清楚。

　　盡管目前尚未獲得selectin家族粘附分子構(gòu)型變化影響粘附能力的直接證據(jù)，但某些抗L-seletin或抗E-selectin分子EGF結(jié)構(gòu)域的單抗非但不阻斷L-selectin分子或E-selecti分子與相應(yīng)配體的結(jié)合，反而具有促進(jìn)作用，提示selectin家族粘附分子中同樣存在著分子構(gòu)型變化對(duì)粘附能力調(diào)節(jié)的可能性。

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