細胞因子生物學活性檢測法是根據(jù)某些細胞因子特定的生物學活性,應用相應的指示系統(tǒng)和標準品來反映待測標本中某種細胞因子的活性水平,一般以活性單位來表示。生物學檢測法一般敏感性較高,直接表示待測標本中的活性水平。但實驗周期較長,如集落形成法需10~14;易受細胞培養(yǎng)中某些因素的影響,如血清、pH、藥物;易受生物學活性相同或相近的其它細胞因子的影響,如檢測IL-2時可受IL-4的干擾,TNF-α和TNF-β(淋巴毒素)表現(xiàn)出極為相似的生物學作用;易受待栓樣品中某些細胞因子抑制物的干擾,如IL-1活性可被IL-1受體拮抗物(IL-1ra)所抑制,TNF-α可被TNF-BP所阻斷;不能區(qū)分某些細胞因子的型和亞型,如IFN-α、β和γ,以及IFN-α中不同的亞型顯示相同的生物學活性;某些指示細胞長期培養(yǎng)易發(fā)生突變;不同指示細胞對同一種細胞因子的敏感性不同,所慕名而來結果難于標準化;此外,某些人源的細胞因子如hIL-2對小鼠細胞起作用,但鼠源性的IL-2對人的細胞則無刺激作用。
生物學檢測的方法大致可分為增殖或增殖抑制、集落形成、直接殺傷靶細胞、保護靶細胞免受病毒攻擊、趨化作用以及抗體形成法等幾類。
(一)增殖或增殖抑制法
其基本原理是應用某一細胞因子能特異地刺激或抑制某些指示細胞的增殖,通過3H-TbR摻入或MTT法顯色,反映待檢細胞因子的活性水平。
。ǘ)集落形成法
其基本原理是應用骨髓干細胞體外半固體培養(yǎng)系統(tǒng),根據(jù)不同造血因子能誘導干細胞或定向造血祖細胞形成某一種或某些種類細胞的集落,通過對形成集落形態(tài)學、酶學鑒定,計算不同種類集落形成的數(shù)量和比例,反映待測標本中CSF的種類和活性水平。
(三)直接殺傷靶細胞
在細胞因子中TNF-α、TNF-β具有直接殺傷某些腫瘤細胞的作用,采用TNF敏感的細胞株如小鼠成纖維細胞株L929,以及WEHI164亞克隆13作為指示細胞,通過3H-TdR釋放法或染料染色等可檢測待檢樣品中TNF的活性水平。醫(yī)學全在線網(wǎng)站www.med126.com
。ㄋ)保護靶細胞免受病毒的攻擊
靶細胞受某些病毒感染后可發(fā)生明顯病變和死亡,干擾素可保護靶細胞免受病毒的攻擊,常用的病毒是水皰性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV),敏感的指示細胞為喉癌的上皮細胞株Hep2和羊膜的上皮細胞WISH,通過干擾素(IFN-α、IFN-β、IFN-γ)抑制病毒致病變的程度,計算出待測樣品中IFN的活性單位。
(五)趨化作用
IL-8對多形核細胞、淋巴細胞具有趨化作用,可用小室法或軟瓊脂趨化法,PMN或淋巴細胞作為指示細胞,以細胞趨化的程度來反映樣品中IL-8活性水平。