本規(guī)程適用于白喉、破傷風(fēng)、氣性壞疽及肉毒四種精制抗毒素。
精制白喉、破傷風(fēng)、氣性壞疽、肉毒抗毒素系分別由各該抗毒素的馬血漿經(jīng)胃酶消化后用硫酸銨鹽析法制得的液體或凍干抗毒素球蛋白制劑。分別用于各該疾病的預(yù)防和治療。
1 制造
1.1對(duì)血漿的要求
1.1.1制造精制抗毒素的血漿,應(yīng)符合附錄1《抗毒素生產(chǎn)用馬匹免疫方法》的規(guī)定。在保存期間如發(fā)一周明顯的溶血、染菌及其他異,F(xiàn)象,不得投入生產(chǎn)。
1.1.2血漿的抗毒素效價(jià)不得低于下列要求:
血漿種類每瓶血漿效價(jià)(IU/ml)
白喉1000
破傷風(fēng)1000
威氏250
膿毒300
水腫550
溶組織550
A型肉毒1000
B型肉毒600
E型肉毒600
以上效價(jià)均以動(dòng)物測(cè)定方法為準(zhǔn)。
1.2制造程序
1.2.1消化
1.2.1.1第1法
血漿用2~4倍水稀釋,調(diào)節(jié)pH至3.2~3.6,加入胃酶適量及甲苯0.2%~0.4%(ml/ml),于29~31℃消化1~1.5小時(shí)。
1.2.1.2第2法
血漿用2~4倍水稀釋,調(diào)節(jié)pH至3.6~4.0,加入胃酶適量及甲苯0.2%~0.4%(ml/ml),于22±℃消化20~22小時(shí)。
1.2.2第1次沉淀及加熱處理。
每100ml消化液加硫酸銨14~16g,白喉及破傷風(fēng)抗毒素調(diào)節(jié)pH至4.8~5.6,氣性壞疽及肉毒抗毒素調(diào)節(jié)pH至4.5~5.0;白喉、破傷風(fēng)、氣性壞疽抗毒素加溫至57~57℃,肉毒抗毒素加溫至50~52℃,均保持30分鐘。加溫終了,盡速降溫至45℃以下,分離,取清液。
1.2.3第2次沉淀
上述清液調(diào)節(jié)pH至7.0~7.4,每100ml加硫酸銨19~21g,分離,取沉淀,壓干。
上述沉淀用水稀釋至蛋白含量不超過(guò)2%(g/ml),加明礬不少于0.8%(g/ml),調(diào)節(jié)pH至7.7~7.9,分離,取清液。
1.2.5濃縮
1.2.5.1第1法
將上述清液第100ml加硫酸銨38g,分離,取沉淀,壓干。沉淀物透析至硫酸銨含量0.1%(g/ml)以下。
1.2.5.2第2法
將上述清液混合,通過(guò)超濾裝置進(jìn)行超濾,濃縮至硫酸銨含量為0.1%(g/ml)以下。
1.2.6最后處理
上述透析后的血清進(jìn)行下列處理:
1.2.6.1調(diào)整固體總量不超過(guò)20%(g/ml)。蛋白含量不超過(guò)17%(g/ml)。
1.2.6.2加氯化鈉使最終含量為0.9%(g/ml)。
1.2.6.3加三氯甲烷使最終含量為0.5%(ml/ml)或硫柳汞液使最終含量為0.01%(g/ml)為防腐劑。用于制造凍干抗毒素者只用三氯甲烷為防腐劑。
1.2.6.4調(diào)節(jié)pH至6.0~7.0。
1.2.6.5除菌過(guò)濾,并做無(wú)菌試驗(yàn)。
1.2.7凍干
經(jīng)除菌過(guò)濾及半成品檢定合格的精制抗毒素,可用凍干法制成干燥制品。
1.3對(duì)制造工藝的要求及規(guī)定
1.3.1制造室內(nèi)部裝修材料應(yīng)便于清潔消毒,地面耐腐蝕,室內(nèi)盡可能低溫,力爭(zhēng)做到無(wú)菌操作。
1.3.2所用儀表和量具應(yīng)精密準(zhǔn)確,并經(jīng)常校正。一切與血漿接觸的器皿、用具等,應(yīng)注意不染有熱原質(zhì),不含有毒物物質(zhì)。消化液加熱處理前后的器皿、用具須嚴(yán)格處理。未經(jīng)處理的器皿、用具不得用于不同批。
1.3.3所用化學(xué)原料的規(guī)格應(yīng)不低于化學(xué)純(三級(jí)純)或符合《中國(guó)生物制品主要原材料試行標(biāo)準(zhǔn)》規(guī)定。胃酶應(yīng)力求活力高,粘液素含量少,類A血型物質(zhì)含量低,并經(jīng)過(guò)活力單位及類A血型物質(zhì)含量測(cè)定。制造用水,應(yīng)采取有效措施防止污染或產(chǎn)生熱原質(zhì)。
1.3.4抗毒素精制的每步操作均應(yīng)盡量除凈非抗毒素蛋白質(zhì),以提高制品純度。
1.3.5制造過(guò)程中加酸、堿及硫酸銨等時(shí),速度不宜過(guò)快,避免局部濃度過(guò)高;酸、堿原液嘗試不宜超過(guò)2mol/L。操作時(shí)應(yīng)盡量避免產(chǎn)生大量泡沫。應(yīng)采取有效措施防止染菌和產(chǎn)生熱原質(zhì)。除必要的操作時(shí)間外,應(yīng)盡量縮短生產(chǎn)周期。
1.3.6制造過(guò)程中必須嚴(yán)格執(zhí)行《生物制品分批規(guī)程》,不得將中間回收品并入不同批內(nèi)。制造批號(hào)不同但制造方法與所含防腐劑相同并經(jīng)檢定(無(wú)菌試驗(yàn)、安全試驗(yàn)、熱原質(zhì)試驗(yàn))合格的半成品可進(jìn)行合并,但合并批數(shù)不得超過(guò)2批。多價(jià)制品,其各單價(jià)半成品合并時(shí),亦應(yīng)符合上述原則。
1.3.7關(guān)于精制抗毒素再制的規(guī)定
1.3.7.1凡屬下列范圍的半成品及成品,可予再制。
(1)熱原質(zhì)試驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性者。
(2)非肉眼可見(jiàn)而通過(guò)無(wú)菌試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)的染菌,經(jīng)過(guò)濾不能除菌者。
(3)理化檢定不合格者。
(4)成品裝量不足者。
(5)超過(guò)效期的庫(kù)存制品。
(6)種類及制造方法相同,批號(hào)及數(shù)量清楚的分裝檢損品及濾器沖洗液可合并再制(但該批再制品的分裝檢損品應(yīng)予廢棄)。
1.3.7.2再制方法可根據(jù)具體情況制定,但制成后的質(zhì)量必須符合檢定要求。
1.3.8多價(jià)氣性壞疽抗毒素按下列單位比例進(jìn)行混合。
威氏:水腫:膿毒=2∶2∶1。
必要時(shí)可加入1份溶組織抗毒素。
1.3.9制成之精制抗毒素,須在冷暗處保存至少1個(gè)月作為穩(wěn)定期。
1.4半成品檢定
由制造部門進(jìn)行理化檢定、無(wú)菌試驗(yàn)、安全試驗(yàn)、熱原質(zhì)試驗(yàn)、類A血型物質(zhì)測(cè)定及效價(jià)測(cè)定。效價(jià)測(cè)定、類A血型物質(zhì)測(cè)定及熱原質(zhì)試驗(yàn)可與質(zhì)量檢定部門會(huì)同進(jìn)行。檢定方法及要求同成品檢定。
2 成品檢定
由質(zhì)量檢定部門進(jìn)行全面檢定,半成品已會(huì)同檢定的項(xiàng)目可抽檢。
2.1鑒別試驗(yàn)
每批成品至少抽取一瓶作以下鑒別試驗(yàn):
2.1.1作動(dòng)物中和試驗(yàn)(同效價(jià)測(cè)定)或免疫擴(kuò)散試驗(yàn),以驗(yàn)證本品系瓶簽標(biāo)示的抗毒素。
2.1.2用兔抗馬血漿的兔Igg 與本品作免疫擴(kuò)散試驗(yàn),以驗(yàn)證本品為馬血清蛋白成分(如同一制造室無(wú)其他動(dòng)物免疫血清生產(chǎn),本試驗(yàn)可免做)。
2.2理化檢定
2.2.1外觀
液體精制抗毒素應(yīng)為幾乎無(wú)色或淡黃色的澄明液體,不得含有渣;虍愇铮L(zhǎng)期貯存后可有微量能搖散的沉淀產(chǎn)生。除血清本身及防腐劑的特有氣味外,不得有其他氣味。凍干精制抗毒素應(yīng)為白色或微帶粉紅色的疏松體,加入規(guī)定量蒸餾水后輕輕搖動(dòng),應(yīng)于15分鐘內(nèi)完全溶解。溶解后的外觀應(yīng)與液體精制抗毒素相同。
2.2.2固體總量及蛋白含量
液體精制抗毒素以及凍干制品的安規(guī)定量溶解后,固體總量不得超過(guò)20%(g/ml)。蛋白含量不得超過(guò)17%(g/ml)。
2.2.3pH值應(yīng)為6.0~7.0。
2.2.4氯化鈉含量應(yīng)為0.85%~0.95%(g/ml)。
2.2.5硫酸銨含量
液體精制抗毒素以及凍干制品按規(guī)定量溶解后,均不得超過(guò)0.1%(g/ml)。
2.2.6液體精制抗毒素的防腐劑,用三氯甲烷者不得超過(guò)0.5%quanxiangyun.cn/wszg/(mlg/ml),用硫柳汞者不得超過(guò)0.01%(g/ml)。
2.2.7凍干quanxiangyun.cn精制抗毒素水分含量不得超過(guò)3%。
2.2.8電泳檢查
將樣品稀釋至2%蛋白濃度,做瓊脂糖電泳分析,應(yīng)不含或僅含痕量白蛋白遷移率的蛋白。
2.2.9F(ab)2含量
用SDS-PAGE法(見(jiàn)《生物制品化學(xué)檢定規(guī)程》)測(cè)定,預(yù)防用抗毒素的F(ab)2含量不得低于50%,治療用抗毒素的F(ab)2含量不得低于60%。
2.3無(wú)菌試驗(yàn)
按《生物制品無(wú)菌試驗(yàn)規(guī)程》進(jìn)行。
2.4安全試驗(yàn)
取體重300~400g豚鼠2只,每只皮下注射精制抗毒素5ml,于第3至5日觀察局部,除輕度紅腫外,應(yīng)無(wú)膿腫及壞死;第7日局部反應(yīng)應(yīng)消失,且體重不輕于注射前,如體重有輕微下降,可繼續(xù)觀察3日,如體重上升且高于注射前,可判為合格。
2.5熱原質(zhì)試驗(yàn)
按《生物制品熱原質(zhì)試驗(yàn)規(guī)程》進(jìn)行,注射劑量為3ml/kg。判定標(biāo)準(zhǔn)按該4.1項(xiàng)要求進(jìn)行。
2.6類A血型物質(zhì)含量。
用血凝抑制法(附錄6)測(cè)定,類A血型物質(zhì)不得超過(guò)4μg/ml。
2.7效價(jià)測(cè)定
2.7.1效價(jià)測(cè)定用標(biāo)準(zhǔn)抗毒素及試驗(yàn)毒素由中國(guó)藥品生物制品檢定所統(tǒng)一定期分發(fā)。
2.7.2各種抗毒素的效價(jià)測(cè)定分別按附錄2~5進(jìn)行。
2.7.3對(duì)各種抗毒素成品(凍干制品系按規(guī)定溶解后)的最低效價(jià)要求如下:
抗毒素種類IU/ml IU/gp
白喉預(yù)防用:2000 30000
治療用:3000 40000
破傷風(fēng)預(yù)防用:2000 35000
治療用:3000 45000
氣性壞疽(多價(jià))1000
氣性壞疽(威氏)1000 8000
氣性壞疽(膿毒)1500 12500
氣性壞疽(水腫)2500 20000
氣性壞疽(溶組織)2500 20000
A型肉毒3000 20000
B型肉毒3000 20000
E型肉毒3000 20000
3 保存
應(yīng)保存在2~8℃冷暗干燥處。
4 效期
自效價(jià)測(cè)定合格之日起,精制抗毒素裝20%(不得低于16%)超量者,液體制品效期為5年,凍干制品效期為7年;裝10%(不得低于8%)超量者,液體制品效期為3年,凍干制品效期為5年。