本品系用傷寒菌培育后取菌苔制成懸液,加甲醛殺菌,以磷酸鹽緩沖生理鹽水稀釋成每ml含菌3億制quanxiangyun.cn/pharm/成。用于預(yù)防傷寒。
1 菌種
1.1菌種來源
制造傷寒菌苗用的菌種及檢定菌種用的診斷血清,應(yīng)由中國藥品生物制品檢定所分發(fā)或經(jīng)同意。
1.2 菌種檢定
定菌種可用pH7.2~7.4的肉湯瓊脂、馬丁瓊脂或其他適宜的培養(yǎng)基。
1.2.1 培養(yǎng)特性
制造菌苗的菌株應(yīng)具有典型的形態(tài)、培養(yǎng)和生化特性。
1.2.2血清凝集試驗
用37℃培育18~20小時的培養(yǎng)物以磷酸鹽緩沖生理鹽水稀釋成含菌6億/ml,與傷寒菌診斷血清作定量凝集試驗,充分混合后放37℃過夜,以肉眼見到凝集(+)之血清最高稀釋度為凝集反應(yīng)之效價。凝集價不應(yīng)低于血清原效價之半。并用傷寒Vi及O血清做凝集試驗,應(yīng)與Vi血清有凝集,與O血清不凝集,或僅有較低凝集。
1.2.3 毒力試驗
用37℃培育12~16小時的瓊脂培養(yǎng)物以生理鹽水稀釋成6億/ml、3億/ml、1.5億/ml及0.75億/ml等濃度的菌液(根據(jù)菌種毒力情況稀釋度可作更改也可增加稀釋度)。每1稀釋度的菌懸液腹腔注射體重14~16g之小白鼠,最少5只,每只0.5ml,觀察3天。使小白鼠于感染后3天內(nèi)全部死亡的最小劑量為1個致死量(LD),1LD應(yīng)不超過1.5億菌。
1.2.4 毒性試驗
用37℃培育18~20小時之瓊脂培養(yǎng)物混懸于磷酸鹽緩沖生理鹽水內(nèi),56℃加溫1小時(或其他方法殺菌)。不加防腐劑。殺菌試驗合格后稀釋為每ml含菌60、30及15億共3個濃度,每個濃度的菌懸液以0.5ml腹腔注射體重15~18g小白鼠5只,觀察3天,注射7.5億菌之小白鼠應(yīng)全部生存,注射15億菌之5只小白鼠可有3只死亡。
1.2.5免疫力試驗
按《傷寒、副傷寒甲、乙三聯(lián)菌苗制造及檢定規(guī)程》1.2.5項進行。
1.2.6 抗原性試驗
選體重2kg左右之健康家兔至少3只,用免疫力試驗所用之菌液靜脈注射3次,每次0.5ml,第1次注射7億菌,第2次14億菌,第3次21億菌,每次間隔7天。末次注射后10~14天采血做定量凝集試驗測定效價,2/3家兔血清之凝集效價不低于1∶12800為合格。
1.3 菌種保存
菌種應(yīng)凍干保存,凍干菌種保存于2~8℃
菌種凍干后應(yīng)抽取樣品按1.2項進行檢查,合格后可使用3年,以后每次生產(chǎn)前必須檢查全部特性一次,合格者可繼續(xù)使用2年。
2 菌苗制造
制造傷寒菌苗應(yīng)選用2個菌株。
2.1 菌種
凍干菌種啟開后應(yīng)檢查菌形、純度及玻片凝集試驗(包括用Vi血清做玻凝集反應(yīng)),合格后即可使用,每啟開1支凍干菌種用于生產(chǎn)不應(yīng)超過6代。
2.2 制造用培養(yǎng)基
用pH7.2~7.4的馬丁瓊脂或肉湯瓊脂或其他適宜的培養(yǎng)基。
2.3 原液制造
2.3.1 接種
可采用涂種,接種后置37℃培育18~24小時。
2.3.2 采集
采集前應(yīng)逐瓶檢查,有雜菌者廢棄。刮取菌苔混懸于磷酸鹽緩沖生理鹽水中。
2.3.3 純菌試驗
原液采集后應(yīng)逐瓶取樣接種瓊脂斜面1管,于37℃培育2天,24~26℃1天,如有雜菌生長應(yīng)廢棄。
2.3.4 殺菌
原液中加入不超過1.1%±0.1%(ml /ml)的甲醛溶液殺菌。加殺菌劑后的原液應(yīng)放在37℃,不得超過7天,以后保存于2~8℃。
2.3.5 無菌試驗
純菌試驗合格的原液,應(yīng)取樣接種不含瓊脂的硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基及普通瓊脂斜面各1管,放37℃培育5天,如有本菌生長,可加培量復(fù)試一次;如有雜菌生長應(yīng)廢棄。
2.3.6 原液合并
無菌試驗合格的原液按不同菌株或不同制造日期分別過濾合并。合并后應(yīng)加不超過0.5%(g /ml)苯酚或其他適宜防腐劑,保存于2~8℃。
2.4 原液檢定
2.4.1 鏡檢
菌形應(yīng)正常,無雜菌。
2.4.2 凝集試驗
原液與相應(yīng)血清進行凝集試驗,其凝集效價不應(yīng)低于血清原效價之半。
2.4.3 無菌試驗
按《生物制品無菌試驗規(guī)程》進行。
2.4.4 濃度制定
應(yīng)按中國細(xì)菌濁度標(biāo)準(zhǔn)與質(zhì)量檢定部門會同測定濃度。
2.4.5 免疫力試驗
原液于無菌試驗合格后與質(zhì)量檢定部門會同進行,抽檢批數(shù)不應(yīng)少于生產(chǎn)批數(shù)的1/5。方法同1.2.5項,唯所用小白鼠每組至少15只,保護60%免疫小白鼠活存為合格。
2.5 原液保存
原液應(yīng)保存于2~8℃。原液自采集之日起至用于菌苗稀釋時不得少于4個月,保存效期自采集之日起為2年半。
2.6菌苗稀釋
2.6.1 原液配合
稀釋前應(yīng)先將不同菌株所制之原液按菌數(shù)等量混合,但每個菌株所加的菌數(shù)與應(yīng)加菌數(shù)在總菌數(shù)不變的原則下允許兩個菌株之間在40%范圍內(nèi)互有增減。
2.6.2 菌苗稀釋
稀釋菌苗用含0.25%~0.5%(g /ml)苯酚或其他適宜的防腐劑之磷酸鹽緩沖生理鹽水。
2.6.3 菌苗濃度
每ml含傷寒菌3億
2.7 菌苗分批
同組配合的原液用同一批稀釋液在同一日稀釋的各瓶菌苗為1批。大罐稀釋的應(yīng)按大罐分批,并按分裝機分為亞批。
2.8 檢定
稀釋后每批應(yīng)逐瓶抽樣進行無菌試驗及測定防腐劑含量(大罐稀時除外quanxiangyun.cn/zhuyuan/)。
2.9 分裝
分裝后每亞批應(yīng)抽樣送質(zhì)量檢定部門進行成品檢定。
3 成品檢定
3.1物理化學(xué)檢查
菌苗應(yīng)為乳白色懸液,pH值為6.8~7.4,不應(yīng)有搖不散的菌塊及異物。苯酚含量應(yīng)為0.25%~0.5%(g /ml)。
3.2 菌形及純度
染色鏡檢,應(yīng)為革蘭氏陰性桿菌。至少觀察10個視野,平均每個視野內(nèi)不得有10個以上非典型菌(線狀、粗大或染色可穎桿菌),并不應(yīng)有雜菌。
3.3 無菌試驗
按《生物制品無菌試驗規(guī)程》進行。
3.4 安全試驗
3.4.1 毒性試驗
用體重18~20g之健康小白鼠5只,每只腹腔注射菌苗0.5ml,或用體重350~450g之健康豚鼠2只,腹腔注射菌苗1.5ml,觀察7日,應(yīng)無死亡。
3.4.2防腐劑試驗
用體重18~20g之健康小白鼠2只,每只皮下注射菌苗0.5ml,用苯酚作防腐劑的菌苗注射之小白鼠會發(fā)生戰(zhàn)栗癥狀,但不應(yīng)超過半小時,觀察7日,不得有局部膿腫或死亡。
4 保存與效期
應(yīng)保存于2~8℃。自稀釋之日起效期為1年半。如原液保存超過1年稀釋,應(yīng)相應(yīng)縮短效期(自原液采集之日起總效期不得超過2年半)。