本品系用弱毒炭疽菌株制成的活芽胞懸液。專供預(yù)防炭疽病之用。1 菌種1.1 菌種來(lái)源為無(wú)莢膜，水腫型，具有一定殘余毒力，免疫原性較好的A16R菌株。由中國(guó)藥品生物制品檢定所分發(fā)或經(jīng)同意。1.2菌種應(yīng)以凍干法或用50%(ml/ml)甘油保存。每3~5年應(yīng)全面檢定其培養(yǎng)特性、殘余…本品系用弱毒炭疽菌株制成的活芽胞懸液。專供預(yù)防炭疽病之用。
1 菌種
1.1 菌種來(lái)源
為無(wú)莢膜，水腫型，具有一定殘余毒力，免疫原性較好的A16R菌株。由中國(guó)藥品生物制品檢定所分發(fā)或經(jīng)同意。
1.2菌種應(yīng)以凍干法或用50%(ml/ml)甘油保存。每3~5年應(yīng)全面檢定其培養(yǎng)特性、殘余毒力、安全性及免疫力，建立種子批。生產(chǎn)前只檢查菌形，培養(yǎng)特性及噬菌體特異性。
1.3菌種檢定
1.3.1 培養(yǎng)及生化特性
在牛肉消化液瓊脂或其他適宜固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，菌落為灰白色，不透明，呈卷發(fā)狀。為革蘭氏陽(yáng)性大桿菌，呈鏈狀排列。無(wú)運(yùn)動(dòng)力。能夠形成芽胞。液體培養(yǎng)呈絮狀發(fā)育，在血清培養(yǎng)基上不形成莢膜。能發(fā)酵葡萄糖、麥芽糖、蔗糖，不分解水楊苷。
1.3.2 殘余毒力試驗(yàn)
用體重350～400g健康豚鼠5只，各皮下注射0.5億/ml的牙包懸液1ml。另用體重18～20g小白鼠5只，各皮下注射0.5億/ml的芽胞懸液0.1ml。觀察10天，3只以上動(dòng)物應(yīng)出現(xiàn)水腫，可有特異死亡。但臟器涂片只應(yīng)找到無(wú)莢膜的本菌。若全部動(dòng)物不出現(xiàn)水腫，應(yīng)重試。重試仍無(wú)水腫，菌種不得用于生產(chǎn)。
1.3.3 安全試驗(yàn)
用體重2.0～2.5kg分健康家兔1quanxiangyun.cn/yishi/0只，各皮下注射2.5億/ml的芽胞懸液1ml，觀察10天，在注射部位可出現(xiàn)水腫，全部動(dòng)物應(yīng)活存。如有死亡，應(yīng)用同數(shù)動(dòng)物重試，重試仍有死亡，菌種不得用于生產(chǎn)。
1.3.4 免疫力試驗(yàn)
上述安全試驗(yàn)動(dòng)物于注射后18～20天，用炭疽毒菌攻擊，各皮下注射20個(gè)MLD。同時(shí)用同體重的健康家兔3只，各皮下注射1個(gè)MLD作為對(duì)照。觀察10天，對(duì)照動(dòng)物死亡3只。試驗(yàn)組保護(hù)60%；對(duì)照組死亡2只，試驗(yàn)組保護(hù)80%為合格。對(duì)照動(dòng)物死亡1只或無(wú)死亡，為對(duì)照不成立，應(yīng)重試。
2 制造
制造菌苗的工作室及設(shè)備應(yīng)當(dāng)專用，不得與其他細(xì)菌工作混用。生產(chǎn)中應(yīng)嚴(yán)格執(zhí)行無(wú)菌操作，非制造菌苗用的其他炭疽菌株不得帶到生產(chǎn)工作室內(nèi)。
2.1 菌種
接種牛肉消化液瓊脂或其他適宜固體培養(yǎng)基，于34℃培育18～20小時(shí)，經(jīng)檢查為純菌者，保存于2～8℃，在2周內(nèi)供作生產(chǎn)種子用。
2.2 培養(yǎng)基
用pH7.2～7.4牛肉消化液瓊脂或其他培養(yǎng)基。
2.3 種子
將供制造用菌種，移種于牛肉消化液中。于34℃培育20～24小時(shí)，檢查其生長(zhǎng)特性、菌形及純度，應(yīng)符合1.3.1項(xiàng)要求。
2.4 接種
經(jīng)檢查合格之種子培養(yǎng)物，接種于牛肉消化液瓊脂上，置33～34℃培育。成熟的典型芽胞達(dá)至80%以上、無(wú)雜菌者采集。
2.5 采集
將培養(yǎng)物刮入50%（ml/ml)甘油蒸餾水原液瓶?jī)?nèi)，振搖使成均勻懸液。每瓶取樣按《生物制品無(wú)菌試驗(yàn)規(guī)程》進(jìn)行純菌試驗(yàn)。
2.6 合并
將純菌試驗(yàn)合格之原液進(jìn)行合并分批，取樣做純菌試驗(yàn)、濃度測(cè)定及活菌計(jì)數(shù)。
2.6.1 純菌試驗(yàn)
按《生物制品無(wú)菌試驗(yàn)規(guī)程》進(jìn)行。
2.6.2 濃度測(cè)定
按中國(guó)細(xì)菌濁度標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定濃度。
2.6.3 活菌計(jì)數(shù)
取0.5億/ml的菌液1ml，按10倍系列稀釋至10-5。取10-5稀釋菌液接種5個(gè)平皿，每個(gè)平皿接種0.1ml。置37℃培育24小時(shí)，計(jì)算每ml菌苗的芽胞活存率。芽胞活存率在50%以上為合格。
2.7 稀釋分裝
2.7.1 稀釋
用滅菌的50%甘油蒸餾水將原液稀釋成每ml含芽胞40億個(gè)，即為皮上劃痕用菌苗。同批原液稀釋之菌苗為作1批。稀釋若干大瓶時(shí)，應(yīng)按瓶號(hào)分為亞批。
2.7.2 分裝
皮上劃痕用菌苗按20人份/ml分裝。規(guī)格為每安瓿1或2ml，抽樣進(jìn)行成品檢定。
3 成品檢定
3.1 物理檢查
應(yīng)為灰白色之均勻懸液，無(wú)異物及搖不散之菌塊。
3.2 純菌試驗(yàn)
按《生物制品無(wú)菌試驗(yàn)規(guī)程》進(jìn)行。
3.3 濃度測(cè)定
按中國(guó)細(xì)菌濁度標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定濃度，應(yīng)為每ml含菌40億±20%
3.4 活菌計(jì)數(shù)
按2.6.3項(xiàng)進(jìn)行。
3.5 安全試驗(yàn)
每批菌苗用體重2.0～2.5kg，健康家兔5只，各皮下注射2.5億/ml的芽胞懸液1ml。觀察10天�？捎兴[，全部動(dòng)物應(yīng)活存。如有死亡，quanxiangyun.cn/job/應(yīng)用加倍量動(dòng)物重試。如仍有死亡，判為不合格。
3.6 免疫力試驗(yàn)
每5批菌苗或不足5批者，至少抽檢1批（可利用安全試驗(yàn)的動(dòng)物)按1.3.4項(xiàng)進(jìn)行。
4 保存與效期
應(yīng)保存于2～8℃。自檢定合格之日起效期為2年。
