| 公開(公告)號(hào) | CN1596268A |
| 公開(公告)日 | 2005.03.16 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN02823601.7 |
| 申請(qǐng)日期 | 2002.11.26 |
| 專利名稱 | 重組人紅細(xì)胞生成素的層析純化 |
| 主分類號(hào) | C07K14/505 |
| 分類號(hào) | C07K14/505 |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | 2001.11.28 US 60/333,839 |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 桑多斯有限公司 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | P·埃利格爾;N·帕爾馬 |
| 地址 | 奧地利昆德 |
| 頒證日 | |
| 國際申請(qǐng) | PCT/EP2002/013299 2002.11.26 |
| 進(jìn)入國家日期 | 2004.05.27 |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 北京市中咨律師事務(wù)所 |
| 代理人 | 黃革生;林柏楠 |
| 國省代碼 | 奧地利;AT |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種從包含宿主細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)基回收和純化重組人紅細(xì)胞生成素(rhEpo)的方法，該方法包括步驟：(a)通過進(jìn)行選自(i)離心后深度過濾，(ii)深度過濾，和(iii)離心的方法，從細(xì)胞培養(yǎng)基除去宿主細(xì)胞、細(xì)胞成分和碎片以獲得澄清的培養(yǎng)基上清液；(b)調(diào)節(jié)上清液的電導(dǎo)率到5mS/cm或以下，并調(diào)節(jié)pH至約7.0到8.0之間；(c)將步驟(b)得到的上清液加到包含陰離子交換層析介質(zhì)的柱上，洗柱子，從柱上洗脫rhEpo，收集含有rhEpo的峰級(jí)分；(d)利用可在中等壓力(＜10bar)下運(yùn)行并且可以抵抗高濃度NaOH的樹脂，將來自步驟(c)的合并的峰級(jí)分進(jìn)行反相層析步驟，利用有機(jī)溶劑的線性梯度洗脫rhEpo；(e)將步驟(d)中洗脫的一個(gè)或多個(gè)含有rhEpo的級(jí)分加到包含陰離子交換層析介質(zhì)的柱上，洗柱子，利用線性鹽梯度洗脫rhEpo；(f)根據(jù)rhEpo的唾液酸化程度，選擇步驟(e)中洗脫的一個(gè)或多個(gè)含有rhEpo的級(jí)分；和(g)利用凝膠過濾介質(zhì)，將一個(gè)或多個(gè)步驟(f)中洗脫的含有rhEpo的級(jí)分進(jìn)行一個(gè)或多個(gè)大小排阻層析步驟以除去潛在的二聚體和更高的聚集體；收集含有rhEpo的洗脫物。 |
| 摘要 | 本發(fā)明提供了一種從包含宿主細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)基回收和純化重組人紅細(xì)胞生成素(rhEpo)的方法，該方法包括步驟：(a)通過利用盤疊式分離器離心，接著深度過濾步驟，從細(xì)胞培養(yǎng)基除去宿主細(xì)胞、細(xì)胞成分和碎片以獲得澄清的培養(yǎng)基上清液；(b)調(diào)節(jié)上清液的電導(dǎo)率到5mS/cm或以下，而調(diào)節(jié)pH至約7.0到8.0之間；(c)將步驟(b)得到的上清液加到包含陰離子交換層析介質(zhì)的柱上，洗柱子，從柱上洗脫rhEpo，收集含有rhEpo的峰級(jí)分；(d)利用可以在中等壓力(＜10bar)下運(yùn)行并且可以抵抗高濃度NaOH的聚苯乙烯樹脂，如Source 30 RPC，將步驟(c)得到的合并的峰級(jí)分進(jìn)行反相層析步驟，利用有機(jī)溶劑的線性梯度洗脫rhEpo；(e)將步驟(d)中洗脫的一個(gè)或多個(gè)含有rhEpo的級(jí)分加到包含Q-Seph HP陰離子交換層析介質(zhì)的柱上，洗柱子，利用線性鹽梯度洗脫rhEpo；(f)根據(jù)rhEpo的唾液酸化程度，選擇一個(gè)或多個(gè)步驟(e)中洗脫的含有rhEpo的級(jí)分；和(g)利用Superdex 75 prep grade，將一個(gè)或多個(gè)步驟(f)中洗脫的含有rhEpo的級(jí)分進(jìn)行一個(gè)或多個(gè)大小排阻層析步驟以除去潛在的二聚體和更高的聚集體；收集含有rhEpo的洗脫物。 |
| 國際公布 | WO2003/045996 英 2003.6.5 |
