公開(kāi)(公告)號(hào)
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CN1291029C
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公開(kāi)(公告)日
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2006.12.20
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申請(qǐng)(專利)號(hào)
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CN200410084809.3
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申請(qǐng)日期
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2004.10.01
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專利名稱
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一種用菜豆間座殼菌真菌代謝的化合物及其制備方法
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主分類號(hào)
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C12P17/18(2006.01)I
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分類號(hào)
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C12P17/18(2006.01)I;C07D493/08(2006.01)I;A61K31/366(2006.01)I;A61P35/00(2006.01)I
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分案原申請(qǐng)?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(qǐng)(專利權(quán))人
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廈門大學(xué)
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發(fā)明(設(shè)計(jì))人
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林 昕;黃耀堅(jiān);徐慶研;鄭忠輝;宋思揚(yáng);蘇文金
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地址
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361005福建省廈門市思明南路422號(hào)
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頒證日
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國(guó)際申請(qǐng)
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進(jìn)入國(guó)家日期
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專利代理機(jī)構(gòu)
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廈門南強(qiáng)之路專利事務(wù)所
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代理人
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馬應(yīng)森
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國(guó)省代碼
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福建;35
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主權(quán)項(xiàng)
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一種用真菌代謝產(chǎn)生的化合物乙酸2-(8-甲基-9-氧雜-雙環(huán)[4.2.1]九-2,4-二烯-7-基)-6-氧-3,6-二氫-2H-吡喃-3-基酯的制備方法,所說(shuō)的真菌為菜豆間座殼菌(Diaporhe phaseolorum)HLY2,登記入冊(cè)的保藏編號(hào)為CCTCC NO:M 204061,所說(shuō)的真菌代謝產(chǎn)生的化合物乙酸2-(8-甲基-9-氧雜-雙環(huán)[4.2.1]九-2,4-二烯-7-基)-6-氧-3,6-二氫-2H-吡喃-3-基酯(Mycoepoxydiene)的結(jié)構(gòu)式為:其特征在于其步驟為:1)液體培養(yǎng)及發(fā)酵液處理:取斜面上菌種接種于半海水配方馬鈴薯液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)至發(fā)酵,發(fā)酵液經(jīng)過(guò)濾,除去菌體,收集發(fā)酵液,分裝后加入體積為發(fā)酵液0.8~1.2倍的乙酸乙酯進(jìn)行萃取,萃取時(shí)間為5~15h,收集萃取所得的有機(jī)相,在45~55℃減壓濃縮至膏狀;2)化合物的分離:取質(zhì)量為上樣量6~10倍的60~100目硅膠,用干法裝柱至硅膠的沉降不再變動(dòng),采用真空液相色譜法進(jìn)行洗脫,洗脫溶劑系統(tǒng)按極性從小到大的順序,由環(huán)己烷開(kāi)始,環(huán)己烷與乙酸乙酯不同體積比混合溶劑,乙酸乙酯,乙酸乙酯與甲醇不同體積混合溶劑,最后至甲醇為洗脫溶劑,總共20級(jí)洗脫梯度進(jìn)行洗脫,收集每個(gè)梯度的洗脫液,45~55℃減壓濃縮至干,共收集20個(gè)回收組分,少量氯仿溶解后至于小管中自然揮干溶劑,若不溶,加入適量甲醇至完全溶解;所用的洗脫溶劑系統(tǒng)洗脫梯度為:環(huán)己烷、環(huán)己烷∶乙酸乙酯=49∶1、環(huán)己烷∶乙酸乙酯=48∶2、環(huán)己烷∶乙酸乙酯=46∶4、環(huán)己烷∶乙酸乙酯=42∶8、環(huán)己烷∶乙酸乙酯=38∶12、環(huán)己烷∶乙酸乙酯=34∶16、環(huán)己烷∶乙酸乙酯=25∶25、環(huán)己烷∶乙酸乙酯=16∶34、環(huán)己烷∶乙酸乙酯=10∶40、乙酸乙酯、乙酸乙酯∶甲醇=46∶4、乙酸乙酯∶甲醇=42∶8、乙酸乙酯∶甲醇=34∶16、乙酸乙酯∶甲醇=25∶25、乙酸乙酯∶甲醇=16∶34、乙酸乙酯∶甲醇=1∶3、乙酸乙酯∶甲醇=1∶4、乙酸乙酯∶甲醇=1∶9、甲醇;3)選取步驟2)中收集的第8管回收組分,進(jìn)行進(jìn)一步硅膠柱分離,取質(zhì)量為上樣量6~10倍的60~100目硅膠,用干法裝柱至硅膠的沉降不再變動(dòng),采用真空液相色譜法進(jìn)行洗脫,洗脫溶劑系統(tǒng)按極性從小到大的順序,由環(huán)己烷∶三氯甲烷=4∶1開(kāi)始,直至三氯甲烷∶甲醇=1∶8,總共18個(gè)洗脫梯度進(jìn)行洗脫,收集每個(gè)梯度的洗脫液,45~55℃減壓濃縮至干,共收集18個(gè)回收組分,少量氯仿溶解后至于小管中自然揮干溶劑,若不溶,加入適量甲醇至完全溶解;所說(shuō)的洗脫溶劑梯度為:環(huán)己烷∶三氯甲烷=4∶1、環(huán)己烷∶三氯甲烷=3∶1、環(huán)己烷∶三氯甲烷=2∶1、環(huán)己烷∶三氯甲烷=1∶1、環(huán)己烷∶三氯甲烷=1∶3、環(huán)己烷∶三氯甲烷=1∶5、環(huán)己烷∶三氯甲烷=1∶6、環(huán)己烷∶三氯甲烷=1∶9、三氯甲烷、三氯甲烷∶甲醇=30∶1、三氯甲烷∶甲醇=20∶1、三氯甲烷∶甲醇=15∶1、三氯甲烷∶甲醇=10∶1、三氯甲烷∶甲醇=8∶1、三氯甲烷∶甲醇=5∶1、三氯甲烷∶甲醇=1∶1、三氯甲烷∶甲醇=1∶4、三氯甲烷∶甲醇=1∶8;4)將步驟3)中回收組分的第7管的管壁上出現(xiàn)的透明針狀晶體,用甲醇溶解完全后常溫自然揮發(fā)溶劑進(jìn)行重結(jié)晶,得到透明針狀晶體,制得的真菌代謝產(chǎn)物為乙酸2-(8-甲基-9-氧雜-雙環(huán)[4.2.1]九-2,4-二烯-7-基)-6-氧-3,6-二氫-2H-吡喃-3-基酯(Mycoepoxydiene)。
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摘要
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化合物乙酸2-(8-甲基-9-氧雜-雙環(huán)[4.2.1]九-2,4-二烯-7-基)-6-氧-3,6-二氫-2H-吡喃-3-基酯及其制備方法,涉及一種真菌代謝產(chǎn)生的化合物,尤其是一種利用新分離獲得的菜豆間座殼菌HLY2代謝產(chǎn)生的化合物Mycoepoxydiene,并將其作為抗腫瘤藥物或其他生物活性的先導(dǎo)物。其步驟為:液體培養(yǎng)及發(fā)酵液處理,壓濃縮至膏狀;取硅膠用干法裝柱至硅膠的沉降不再變動(dòng),洗脫;選取回收組分,進(jìn)一步硅膠柱分離,取硅膠用干法裝柱至硅膠的沉降不再變動(dòng),洗脫;將晶體用甲醇溶解后揮發(fā)溶劑重結(jié)晶,得到透明針狀晶體?捎糜诳鼓[瘤藥物或其他生物活性的先導(dǎo)物。
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國(guó)際公布
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