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衛(wèi)生毒理學(xué)-實驗指導(dǎo):實驗一 經(jīng)口急性毒性試驗

衛(wèi)生毒理學(xué):實驗指導(dǎo) 實驗一 經(jīng)口急性毒性試驗:◎<(一)目的> ◎<(二)原理&醫(yī)學(xué)三基gt;◎<(三)內(nèi)容>◎<(四)材料和試劑>◎<(五)操作步驟>◎<(六)結(jié)果評定>◎<(七)實驗報告>※<(一)目的>化學(xué)毒物經(jīng)口急性毒性試驗是研究化學(xué)物毒性效應(yīng)的基本試驗。奉實習(xí)的目的是學(xué)習(xí)急性毒性試驗的實驗設(shè)計原則,學(xué)會經(jīng)口灌胃技術(shù)、隨機(jī)分組方法,掌握主要的LD50計算方法和急性毒性分級標(biāo)準(zhǔn)。返回頂部※<(二)原理>選擇健康的實驗動物,根據(jù)體重按隨機(jī)
<(一)目的>

<(二)原理&醫(yī)學(xué)三基gt;

<(三)內(nèi)容>

<(四)材料和試劑>

<(五)操作步驟>

<(六)結(jié)果評定>

<(七)實驗報告>
※<(一)目的>

 化學(xué)毒物經(jīng)口急性毒性試驗是研究化學(xué)物毒性效應(yīng)的基本試驗。奉實習(xí)的目的是學(xué)習(xí)急性毒性試驗的實驗設(shè)計原則,學(xué)會經(jīng)口灌胃技術(shù)、隨機(jī)分組方法,掌握主要的LD50計算方法和急性毒性分級標(biāo)準(zhǔn)。

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※<(二)原理>

 選擇健康的實驗動物,根據(jù)體重按隨機(jī)分組的方法,依據(jù)LD50計算的設(shè)計原則將動物分成數(shù)個染毒組。一次或24h內(nèi)多次給予受試物后,了解動物所產(chǎn)生的急性毒性反應(yīng)及其嚴(yán)重程度,中毒死亡的特征以及可能的死亡原因,觀察受試物毒性反應(yīng)與劑量的關(guān)系,求出半數(shù)致死劑量(LD50),并根據(jù)LD50值將受試物進(jìn)行急性毒性分級。

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※<(三)內(nèi)容>

1.健康小鼠或大鼠的選擇,性別的辨認(rèn)。

2.稱重、編號和隨機(jī)分組方法。

3.受試化學(xué)物溶液的配制。

4.小鼠和大鼠經(jīng)口灌胃操作技術(shù).

5.毒性體征的觀察、LD50計算和毒性分級

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※<(四)材料和試劑>

 1.實驗動物  健康成年小鼠或大鼠若干只。

 2.器材  灌胃針(大鼠、小鼠適用)、注射器(0.25,1.2,5m1)、吸管(0.1,0.2,0.5,1,2,10ml)、容量瓶(10,25,50ml)、燒杯(10,25,50ml)、滴管、電子天平(感應(yīng)量1/10000g)、動物體重秤、外科剪刀、鑷子。

 3.試劑  受試物(由指導(dǎo)教師自定),苦味醒酒精飽和液,o.5%品紅溶液或其他染色劑.

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※<(五)操作步驟>
 

1.健康動物的選擇。

2.性別辨認(rèn)。

3.動物稱重、編號和分組;

  (1)稱重;稱量大、小鼠體重的秤,其感應(yīng)量需在0.1g以下,并經(jīng)過校正。稱量時注意輕抓輕放動物,避免激惹,等動物安靜后記錄體重讀數(shù),以g表示。

  (quanxiangyun.cn/wsj/2)編號:以染色法編號。用苦味醒酒精飽和液為染料。以黃色為個位數(shù)號碼,紅色為十位數(shù)號碼。一股以頭部為1號,按順時針依次右前肢為2號,右腰為2號,右后肢為4號,尾根部為5號,右后肢為s號,左腰為7號,左前肢為8號,后背為9號,10號為在頭部染紅色標(biāo)記,11號在右前肢染紅色和黃色標(biāo)記各一,依次類推。

  (3)隨機(jī)分組。

  4.劑量設(shè)置  由指導(dǎo)教師根據(jù)受試物類別,選擇LD50計算方法設(shè)計劑量組。

  5.受試物的配制

  (1)量取受試物:固體化學(xué)物采用稱量法,液體化學(xué)物可用稱量法或吸量法

  1)稱量法:將受試物放入已知重量的容器內(nèi)稱重。加溶劑溶解或稀釋,傾入刻度容器(如容量瓶)內(nèi),混勻,再加溶劑至刻度。算出濃度(rog/mi)備用。

  2)吸量法:依設(shè)計劑量計算出應(yīng)吸取液態(tài)受試物的容積,加入容量瓶中,用溶劑加至

刻度。計算公式為:

X=A*V/d*1000

式中;x:應(yīng)吸取受試物的容積(mD;

A:設(shè)計要求的受試物濃度(mg/ml:

V:容量瓶容積(m1);

d;受試化學(xué)物比重。

(2)受試物的稀釋

  1)等濃度稀釋法:將受試化學(xué)物配成一種濃度,此時各劑量組的實驗動物將給予不同體積的受試物。例如受試物配成1000mg/lOml的溶液,五個劑量組的劑量分別為100、200、400、800、1600mg/kg,則各劑量組動物將依次給予1.0mi/kg、2.Omi/kg直至最高劑量組的16mi/kg。

  2)等容量稀釋法:按照事先設(shè)計的劑量分別稀釋配制為幾種不同濃度的受試物溶液,各個劑量組的動物均給予相同單位體重體積的受試化學(xué)物。如上例的情況,將受試物別配成l00mg/10ml、200mg/l0ml、400mg/10ml、800mg/10ml、1600mg/10ml 5個濃度,溶液,各劑量組動物給予受試物的體積均為l0ml/kg。

  6、灌胃操作  小鼠、大鼠及豚鼠灌冒法:采用專用小鼠和大鼠灌胃針,也可自制。將頭的16號注射針(適用于小鼠)或20~24號腰穿針(適用于大鼠、豚鼠)(注意事先可用錫在針尖周圍焊一圓頭,使其不易損傷動物的消化遭)安裝在適當(dāng)容積的注射器上,吸所需的受試物溶液,左手抓住動物雙耳后至背部的皮膚(小鼠僅抓住耳后、頸部的皮膚,無名指、小手指和大魚際肌將其尾根部壓緊),將動物固定成垂直體位,腹部面向操作。注意使動物的上消化道固定成一直線。右手持注射器,將針頭由動物口腔側(cè)插入,避牙齒,沿咽后壁緩緩滑人食管。若遇阻力,可輕輕上下滑動探索,一旦感覺阻力消失,即深人至胃部。如遇動物掙扎,應(yīng)停止進(jìn)針或?qū)⑨槹纬,千萬不能強行插入,以免穿破食,甚至誤入氣管,導(dǎo)致動物立即死亡。

 一般進(jìn)針深度小鼠2.5~4cm,大鼠或豚鼠4~6cm。為了驗明是否已正確地插入胃部,可輕輕回抽注射器,如無氣泡抽出,表明已插入胃中;如有大量氣泡,則提示誤插氣管,應(yīng)抽出重插。隨后將受試物溶液注入。灌胃容量小鼠通常為o.2~1ml,大鼠1~4ml,豚鼠l~5ml。

7.中毒體征和動物死亡情況觀察  染毒后注意觀察毒性體征和死亡情況。高劑量組動物的死亡常很快發(fā)生,染毒后應(yīng)即刻密切觀察。觀察和記錄中毒體征及出現(xiàn)的時間、死亡數(shù)量和時間及死亡前的特征。根據(jù)觀察情況分析中毒特點和毒作用靶器官.

LD50計算:根據(jù)受試物的種類由指導(dǎo)教師事先確定采用何種方法(改進(jìn)寇氏法、霍恩法等)進(jìn)行計算,并在試驗前設(shè)計劑量分組和每組動物數(shù)。選擇適宜的方法求出LD50及95%的可信限范圍.如毒性反應(yīng)存在性別差異,應(yīng)分別求出不同性別動物的LD50值。

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※<(六)結(jié)果評定>

 

 根據(jù)實驗動物中毒體征、死亡時間和特征、LD50,按受試物種類急性毒性分級標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評定,判斷該受試物的毒性大小及毒性特征。

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※<(七)實驗報告>

實驗報告應(yīng)包括以下內(nèi)容;

1.實驗動物的種屬、晶系、性別及來源。實驗前動物禁食和健康狀況。

2.實驗動物體重和隨機(jī)分組情況.

3.受試物的名稱、來源、純度、性狀等情況。

4.受試物的配制和溶媒。

5.詳細(xì)描述實驗觀察的中毒表現(xiàn)和死亡情況等。

6.LD50的計算方法和結(jié)果。

  7.受試物的毒性分級、分級依據(jù)和結(jié)果評價。

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