衛(wèi)生毒理學(xué)電子教材-第九章 外來化合物的免疫毒性作用及其試驗(yàn)方法:第二節(jié) 免疫毒理試驗(yàn)中常用的方法

 為鑒定外來化合物對(duì)免疫系統(tǒng)的毒性，必須建立一系列靈敏、特異、簡(jiǎn)便、快速的檢測(cè)方法，大多數(shù)免疫毒理學(xué)家認(rèn)為，要建立一組實(shí)驗(yàn)方法來評(píng)價(jià)免疫毒性。

一、病理學(xué)常規(guī)檢查

淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)試驗(yàn)是測(cè)定T細(xì)胞和B細(xì)胞功能活性的簡(jiǎn)便方法，重復(fù)性也較好。

有許多方法可用來檢測(cè)體液免疫功能，包括抗體滴度、抗體形成細(xì)胞（PFC)及B細(xì)胞受體試驗(yàn)等。

抗體形成細(xì)胞試驗(yàn)是一種敏感而且常用的方法。通常用的抗原有綿羊紅細(xì)胞（SRBC)、牛血清白蛋白（BSA)、卵白蛋白（0valbumin)、脂多糖（LPS)等。

細(xì)胞免疫功能主要由T細(xì)胞完成，細(xì)胞免疫擔(dān)負(fù)著遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)、移植排斥、腫瘤免疫等。

用來測(cè)定細(xì)胞免疫功能的方法有體內(nèi)法（遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)、移植物抗宿主反應(yīng)、皮膚移植排斥反應(yīng))和體外法（淋巴細(xì)胞增殖、T細(xì)胞毒性及淋巴因子的產(chǎn)生)。

體內(nèi)檢測(cè)遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)的方法應(yīng)用較廣，在一般情況下遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)可以反映機(jī)體細(xì)胞免疫狀況。原理是當(dāng)致敏的T細(xì)胞再次接觸相應(yīng)的抗原后，就能引起局部的致敏淋巴細(xì)胞釋放出多種淋巴因子，導(dǎo)致以單核細(xì)胞浸潤(rùn)為主的炎癥反應(yīng)，表現(xiàn)為皮膚紅腫硬結(jié)。這種反應(yīng)一般在抗原注射后24～48小時(shí)可以見到。

在人體檢測(cè)遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)可采用皮試法。皮試法中所用的抗原有特異性病原微生物性抗原，如結(jié)核菌素（OT)、白喉病毒、腮腺炎病毒等；還有非特異性抗原，如二硝基氯苯、二硝基氟苯及植物血凝素等。結(jié)果判定是根據(jù)硬結(jié)的縱橫直徑平均值，一般在5mm以上為陽(yáng)性反應(yīng)。

巨噬細(xì)胞在免疫反應(yīng)中具有很重要的作用，它不僅有非特異性吞噬功能，還參與細(xì)胞免疫和體液免疫。巨噬細(xì)胞有多種功能，例如吞噬作用、胞內(nèi)殺傷、抗原攝取和處理、產(chǎn)生干擾素以及對(duì)感染細(xì)胞或惡變細(xì)胞的殺死和溶解作用等。

機(jī)體在接觸化學(xué)物質(zhì)后，可改變其對(duì)細(xì)菌、病毒、寄生蟲及可移植腫瘤和自發(fā)腫瘤的抵抗力。一般認(rèn)為，B細(xì)胞缺損，機(jī)體對(duì)細(xì)菌敏感性升高；T細(xì)胞缺損，則對(duì)病毒、寄生蟲、腫瘤敏感性增高。這種試驗(yàn)是在動(dòng)物身上進(jìn)行的整體試驗(yàn)。

   1．腫瘤細(xì)胞攻擊試驗(yàn) 本試驗(yàn)用純系小鼠觀察機(jī)體對(duì)同系基因的腫瘤細(xì)胞的抵抗力。攻擊所用的腫瘤細(xì)胞量是使10%～20%正常動(dòng)物發(fā)生腫瘤的量。觀察指標(biāo)為腫瘤發(fā)生率、死亡率、發(fā)生腫瘤的平均潛伏期、腫瘤大小、結(jié)節(jié)數(shù)目以及平均死亡時(shí)間等。