�。ǘ�)凝膠過(guò)濾法
為純化免疫金探針的最好方法，其特點(diǎn)是簡(jiǎn)便，過(guò)濾的膠體金顆粒比較均勻，不容易凝集，而離心方法轉(zhuǎn)速高，時(shí)間長(zhǎng)，膠體金顆粒沉淀容易凝集，用凝膠過(guò)濾克服了這一弱點(diǎn)。選用本方法時(shí)膠體金溶液必須用牛血清白蛋白作穩(wěn)定劑。具體操作過(guò)程如下：
�。�1)將濃縮好的膠體金以1500r/min離心去掉大的聚合物。吸出上清待過(guò)柱。
（2)柱高34cm,直徑1cm,加樣體積為柱床體積的1/10。
（3)丙烯葡聚糖S-400（Sephacryls—400, Pharmacia, Sweden)裝柱后用0.02mol/l pH8.2 TBS平衡層析柱（pH7.4者用于標(biāo)記的SPA)，平衡好后，吸取上清膠體金液體加入層析柱內(nèi)，加樣時(shí)請(qǐng)注意不要破壞S—400的界面。
�。�4)用0.02mol/l pH8.2 TBS洗脫，先行濾出的液體有少量微黃不透亮的液體，緊接著是濃度高紅色而透亮的膠體金，注意顏色的變化，如紅色變淡，變黃立刻停止收集。如Sephacryls—400沒(méi)有，也可以用Sepharose –4B或6B代替（Pharmacia,Sweden)也能收到較好的效果。
六、免疫金探針的鑒定
（1)用有Formvar 膜的鎳網(wǎng)沾取金標(biāo)蛋白溶液，空氣中干燥后醋酸鈾復(fù)染，在TEM下觀察，可見(jiàn)金顆粒周圍有一明顯的空暈，表示顆粒表面吸附有蛋白質(zhì)分子。
（2)純化后免疫金探針是否保持很好的生物學(xué)活性是判斷其質(zhì)量好壞的主要指標(biāo)，因此，在使用之前必須對(duì)它的特異性，敏感性進(jìn)行鑒定。鑒定舉例，用陽(yáng)性抗原片，脫蠟至水，胰蛋白酶消化，加第一抗體（多克隆或單克隆)，一般過(guò)夜再加標(biāo)記抗同一抗特異性抗體結(jié)合的膠體金溶液（多克隆或單克隆抗體標(biāo)記的膠體金)詳細(xì)方法步驟見(jiàn)后IgGS法，一般做1：2，1：4，1：8，1：16，稀釋SPA-金，做1：10，1：20，1：40，1：80稀釋，37℃45min，沖洗，顯色，觀察結(jié)果，染色效價(jià)以陽(yáng)性結(jié)果明確，背景淺的稀釋度為標(biāo)準(zhǔn)。免疫細(xì)胞化學(xué)染色試驗(yàn)可以較全面地反應(yīng)免疫金探針的質(zhì)量。
