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您現(xiàn)在的位置: 醫(yī)學全在線 > 理論教學 > 基礎學科 > 免疫細胞與核酸分子雜交 > 正文:免疫膠體金銀細胞化學染色的固定劑選擇
    

免疫膠體金銀染色的固定劑選擇

  免疫膠體金銀染色和其它免疫細胞化學方法一樣,要想得到好的染色效果,關鍵取決于標本處理是否合適,只有使抗原性及組織結構保存的好,才能使以后的染色成功成為可能,其次要用高特異性和高效價的一抗,選擇合適的稀釋度。由于免疫組化方法廣泛應用于不同的生物學科,所要檢出的抗原種類繁多,性質也各不相同。因此,不可能有一種適用于所有抗原的固定劑,而是根據(jù)不同的抗原性質區(qū)別對待。根據(jù)我們使用的固定劑介紹如下,供參考。

  一、固定劑的選擇及固定時間(詳見表5-9)

  (1)Karovsky's 液pH7.3。

 。2)PAP液(Periodate—lysine – paraformaldehyde fixative)

  配制見附錄一。

表5-9 各種抗原固定劑的選擇及固定時間

待檢抗原 固定劑的種類 固定時間
蛋白質    
冰凍切片不固定,或用95%乙醇,B5固定液 10 min
激素 冰凍切片,涂片,印片,不固定或丙酮,甲 10 min
醇,乙醇,PEG固定,B5固定液固定 430 min
免疫球蛋白 中性福爾馬林,四氯化碳(1%甲醛) 30 min
白蛋白 95%乙醇含1~5%冰醋酸 30 min
纖維蛋白元 同上 30 min
病毒 丙酮,100%乙醇,甲醇,乙醚 30 min
糖蛋白 PLP,丙酮 30 min
脂質Forssman 中性福爾馬林 20 min
抗原 2.5%硫代硫酸鈉,冰凍切片不固定 20 min
免疫電鏡 PLP,戊二醛,戊二醛—多聚甲醛(Kacnovsky’s 液pH7.3)PEG、ECD-G等 30min

  二、切片的處理與粘附。

  免疫組化染色過程較長,洗的次數(shù)很多,而且均在振蕩洗滌,抗原片附貼不緊,往往在最后的時刻,還沒有等顯色就會脫落導致前功盡棄,這個環(huán)節(jié) 雖小卻會影響大局,因此,為了保證切片染色成功必須把切片處理好,解除掉片的后顧之憂(方法見第一章 )。

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