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直接進樣(direct injection)是近幾年發(fā)展起來的一種樣品不需要經(jīng)過預處理或只經(jīng)簡單的處理后直接注入色譜中進行分析.
在用HPLC進行體液中藥物分析或生物樣品分析時常需進行預處理,因為:1.為了使樣品的物理狀態(tài)適用于色譜柱.2.使帶測組分得到富集以達到儀器的靈敏度.
當組分樣品同時含有大量蛋白質或其他內源性雜支時,預處理的方法比較復雜繁瑣.因此近年來在直接進樣方面有了很大的發(fā)展,目的就是為了解決這類問題.主要集中于直接進樣用固定相,柱切換技術及膠束色譜等方面.
下面簡單的介紹這三方面:
1. 直接進樣用固定相
直接進樣用固定相有如下特點.
(1)在一定條件下固定相對蛋白質不保留或幾近不保留,而被測組分能夠被保留在柱上進行分離.
(2)當被測組分的K落在合理的范圍內時于固定相匹配的流動相中有機改性劑的溶度保持在低水平上,即固定相對被測組分的保留不能太強,避免由于流動相中有機改性劑的比例增加使蛋白質沉積在柱上.固定相具有以上的特征主要是利用小孔徑硅膠對蛋白質的排阻性質和對硅膠基體表面進行適當?shù)母男詠韺崿F(xiàn)的.例如當?shù)鞍踪|的直徑大于硅膠孔徑時,蛋白質分子就完全被排阻于填料孔徑之外.因此為了使蛋白質不保留或幾近不保留需對硅膠進行改性. 醫(yī).學.全.在.線www.med126.com
改性后的硅膠可以分為兩類(1)硅膠內外具有不同的鍵合基團內表面親水,不吸附蛋白質,內表面疏水保留藥物.(2)硅膠的內外表面具有相同的組成,都鍵合有親水疏水的基團,其作用是首先引入親水基團調節(jié)外表面的疏水性,使蛋白質不沉積在外表面,但同時存在疏水基,外表面仍吸附部分蛋白質.但當飽和時就不在吸附了,其次被測組分進入填料的空隙中,于混合基團的疏水基作用,保留在固定相中.
目前主要應用的直接分析用固定相有以下幾種:
(a) 屏蔽疏水固定相（SHP）
SHP的硅膠上鍵合有親水性聚氧化乙烯的網(wǎng)狀結構，內有疏水性的苯基。小分子可以通過網(wǎng)狀結構，大分子則被屏蔽在柱填料間隙處被洗脫。此固定相具有穩(wěn)定性好重現(xiàn)性好的特點，經(jīng)過1000次含有甲氧芐啶的血清直接進樣，色譜柱性能無較太大改變。
(b) 混合功能基固定相（MEP）
是指在多孔硅膠表面上同時鍵合有疏水和清水兩種基團的固定相。特點是對于親水性和疏水性的藥物均適用�？捎糜谘逯袠O性較大的和非極性的藥物直接進樣分析，用這種固定相已成功的分析了血樣中的苯巴比妥、苯妥英、卡馬西平等抗癲癇藥的分析。
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