免疫膠體金銀染色和其它免疫細(xì)胞化學(xué)方法一樣,要想得到好的染色效果,關(guān)鍵取決于標(biāo)本處理是否合適,只有使抗原性及組織結(jié)構(gòu)保存的好,才能使以后的染色成功成為可能,其次要用高特異性和高效價的一抗,選擇合適的稀釋度。由于免疫組化方法廣泛應(yīng)用于不同的生物學(xué)科,所要檢出的抗原種類繁多,性質(zhì)也各不相同。因此,不可能有一種適用于所有抗原的固定劑,quanxiangyun.cn/yishi/而是根據(jù)不同的抗原性質(zhì)區(qū)別對待。根據(jù)我們使用的固定劑介紹如下,供參考。
(1)Karovsky's 液pH7.3。
(2)PAP液(Periodate—lysine – paraformaldehyde fixative)
配制見附錄一。
表5-9 各種抗原固定劑的選擇及固定quanxiangyun.cn/pharm/時間
待檢抗原 | 固定劑的種類 | 固定時間 |
蛋白質(zhì) | ||
酶 | 冰凍切片不固定,或用95%乙醇,B5固定液 | 10 min |
激素 | 冰凍切片,涂片,印片,不固定或丙酮,甲 | 10 min |
醇,乙醇,PEG固定,B5固定液固定 | 4℃30 min | |
免疫球蛋白 | 中性福爾馬林,四氯化碳(1%甲醛) | 30 min |
白蛋白 | 95%乙醇含1~5%冰醋酸 | 30 min |
纖維蛋白元 | 同上 | 30 min |
病毒 | 丙酮,100%乙醇,甲醇,乙醚 | 30 min |
糖蛋白 | PLP,丙酮 | 30 min |
脂質(zhì)Forssman | 中性福爾馬林 | 20 min |
抗原 | 2.5%硫代硫酸鈉,冰凍切片不固定 | 20 min |
免疫電鏡 | PLP,戊二醛,戊二醛—多聚甲醛(Kacnovsky’s 液pH7.3)PEG、ECD-G等 | 30min |
免疫組化染色過程較長,洗的次數(shù)很多,而且均在振蕩洗滌,抗原片附貼不緊,往往在最后的時刻,還沒有等顯色就會脫落導(dǎo)致前功盡棄,這個環(huán)節(jié) 雖小卻會影響大局,因此,為了保證切片染色成功必須把切片處理好,解除掉片的后顧之憂(方法見第一章 )。