| 公開(kāi)(公告)號(hào) | CN1197631C |
| 公開(kāi)(公告)日 | 2005.04.20 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN02159528.3 |
| 申請(qǐng)日期 | 2002.12.30 |
| 專利名稱 | 一種含有表皮生長(zhǎng)因子的皮膚組織工程支架的構(gòu)建方法 |
| 主分類號(hào) | A61L27/60 |
| 分類號(hào) | A61L27/60;A61F13/02;A61F2/02 |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 中國(guó)皮革和制鞋工業(yè)研究院;中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射醫(yī)學(xué)研究所;;研究所 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 楊穎颙;于淑賢;劉杰;王德文 |
| 地址 | 100016 北京市朝陽(yáng)區(qū)將臺(tái)西路18號(hào) |
| 頒證日 | |
| 國(guó)際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國(guó)家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 北京科興園專利事務(wù)所 |
| 代理人 | 王蘊(yùn);屈獻(xiàn)莊 |
| 國(guó)省代碼 | 北京;11 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種含有表皮生長(zhǎng)因子的皮膚組織工程支架的構(gòu)建方法，其特征在于它按下述步驟進(jìn)行：(a)、以胎牛皮或牛跟腱為基料，按常規(guī)方法進(jìn)行脫毛、去筋膜及脂肪和污血、清洗、冷凍、切薄片，用丙酮脫水，再用石油醚脫脂，制成脫水脫脂的胎牛皮或牛跟腱為原料，用雙蒸水清洗原料后加入反應(yīng)器內(nèi)，加入原料重量1～5％的胃酶或無(wú)花果酶或木瓜酶或胰凝乳蛋白酶或菠蘿酶，與原料重量10倍的水配制的水溶液進(jìn)行一次酶處理，在20～40℃、pH＝2～8條件下、機(jī)械振動(dòng)8～12小時(shí)，降解組織纖維間的共價(jià)鍵，經(jīng)離心分離，棄上清液取沉淀用雙蒸餾水洗滌三次以上，加入原料重量的50～150倍的0.5M醋酸溶液，在0～20℃溫度下，振動(dòng)24～32小時(shí)，再加入氯化鈉，使溶液中氯化鈉濃度達(dá)到2M，沉淀完全后，經(jīng)離心分離，棄上清液取沉淀裝入透析袋進(jìn)行透析3～4次，收集透析后膠原溶液，加入反應(yīng)器內(nèi)，并加入上述原料重量1～3％的無(wú)花果酶或木瓜酶或胰凝乳蛋白酶或菠蘿酶，與原料重量10倍的配制的水溶液進(jìn)行二次酶處理，在30～40℃、pH＝2～8條件下、機(jī)械振動(dòng)4～8小時(shí)，去除抗原決定簇；再按常規(guī)方法酶滅活處理，經(jīng)離心分離，棄上清液用原料重量50～150倍的0.05～0.5M的醋酸水溶液溶解，得到酸溶性0.5～4mg/ml的無(wú)抗原性膠原溶液；(b)、再將(a)項(xiàng)的無(wú)抗原性膠原溶液倒入預(yù)冷模型中，在-10～-70℃溫度下冷凍4～24小時(shí)，再真空冷凍干燥24～48小時(shí)，得到孔徑均勻，厚度為0.1～0.5mm的膠原海綿膜，然后置入0.5～10％濃度的丙三醇水溶液中，丙三醇水溶液用量為膠原海綿膜重量50～150倍，吸附膨脹后取出膠原海綿膜，在105～130℃溫度下，真空干燥18～32小時(shí)，得到干膠原海綿膜；(c)、將肝素溶于0.005～1M的醋酸水溶液中，水溶液肝素含量為0.1～10mg/ml，然后用100目濾網(wǎng)過(guò)濾，得到肝素醋酸水溶液；(d)、將表皮生長(zhǎng)因子溶于三蒸水中，三蒸水中表皮生長(zhǎng)因子的含量為0.001～0.1μg/ml，得到表皮生長(zhǎng)因子水溶液；(e)、最后將(c)項(xiàng)的肝素醋酸水溶液和(d)項(xiàng)的表皮生長(zhǎng)因子水溶液按體積比1∶1～50的比例混合，機(jī)械振動(dòng)48小時(shí)后，將上述混合液再與5％的丙三醇水溶液按體積比0.1～5∶100混合后，浸潤(rùn)(b)項(xiàng)的干膠原海綿膜，潤(rùn)濕后，在-10～-70℃溫度下，冷凍4～10小時(shí)，再真空干燥，得到的構(gòu)建含有表皮生長(zhǎng)因子的皮膚組織工程支架。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及一種含有表皮生長(zhǎng)因子的皮膚組織工程支架的構(gòu)建方法，其特征是它以胎牛皮或牛跟腱為基料，經(jīng)過(guò)脫水、脫脂處理，進(jìn)行一次酶處理，降低組織纖維間的共價(jià)鍵，再經(jīng)透折，進(jìn)行二次處理，除去抗原決定簇，再用醋酸溶解得到無(wú)抗原性膠原溶液，再制成膠原海綿膜，用丙三醇浸泡吸附，經(jīng)干燥后將肝素醋酸水溶液與表皮生長(zhǎng)因子水溶液的混合物與丙三醇再次混合潤(rùn)濕膠原海綿膜，經(jīng)冷凍干燥構(gòu)建成皮膚組織工程支架。該支架具有無(wú)抗原性、強(qiáng)度高、柔韌性好、手術(shù)植入方便、對(duì)創(chuàng)傷面無(wú)毒害，并可有效誘導(dǎo)創(chuàng)傷面部位自體細(xì)胞生長(zhǎng)、促進(jìn)創(chuàng)面愈合的優(yōu)點(diǎn)及效果。 |
| 國(guó)際公布 |
