| 公開(公告)號 | CN100335622C |
| 公開(公告)日 | 2007.09.05 |
| 申請(專利)號 | CN03116054.9 |
| 申請日期 | 2003.03.28 |
| 專利名稱 | 巴曲酶基因的合成及其表達產(chǎn)物的純化制備 |
| 主分類號 | C12N9/50(2006.01)I |
| 分類號 | C12N9/50(2006.01)I;C12N15/57(2006.01)I;C12N15/63(2006.01)I;C12N15/80(2006.01)I;C12N15/70(2006.01)I;A61K38/48(2006.01)I;A61P7/04(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權 | |
| 申請(專利權)人 | 上海萬興生物制藥有限公司 |
| 發(fā)明(設計)人 | 黃秀東;陳佩新;肖建國;阮振興;曾強松;潘學工;曹之舫 |
| 地址 | 201206上海市浦東新區(qū)楊高北路4705弄58號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構 | 北京北新智誠知識產(chǎn)權代理有限公司 |
| 代理人 | 郭佩蘭 |
| 國省代碼 | 上海;31 |
| 主權項 | 一種重組巴曲酶，其特征在于：它通過基因工程的方法制成，該方法包括以下幾個步驟：(1)、基因合成：按照巴西矛頭蛇毒液中巴曲酶的氨基酸序列，選擇巴曲酶結構基因所用的密碼子，所述的巴曲酶結構基因所用的密碼子為酵母或大腸桿菌都比較偏好的密碼子，采用人工合成的方法，獲得巴曲酶結構基因序列SEQ-2；或采用同樣的人工合成的方法，獲得完全由甲醇酵母喜好的密碼子組成的巴曲酶結構基因序列SEQ-3。(2)、表達載體的構建：在巴曲酶基因的5′-端添加限制酶XhoI的切點，3′-端添加TAATGA雙終止密碼子及NotI切點，另在XhoI的切點與巴曲酶蛋白N-端第一個氨基酸Val密碼子之間加入酵母KEX2蛋白酶識別序列Lys-Arg對應的密碼子AAAAGA，將該DNA片段插入pPICZαA或pMETαA載體中，得pPICZαA-Bg或pMETαA-Bg表達載體，克隆，培養(yǎng)，提取質(zhì)粒；(3)、巴曲酶的表達：用DNA限制內(nèi)切酶將表達載體pPICZαA-Bg或pMETαA-Bg線性化，制備酵母宿主菌的感受態(tài)，并進行電轉化；克隆，并進行表達、篩選，得到高表達菌株；(4)、巴曲酶工程菌的上罐發(fā)酵及表達產(chǎn)物的純化。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及一種基因重組方法制備的巴曲酶(Batroxobin)，其關鍵是巴曲酶基因的合成、表達以及表達產(chǎn)物的純化制備和性質(zhì)確定。這種重組的巴曲酶既可以作為一種止血藥的主要成分，也可以直接用作降纖藥物。 |
| 國際公布 |
