方法名稱： |
積雪草總苷元—羥基積雪草酸的含量測(cè)定—HPLC-DAD |
應(yīng)用范圍： |
用于50%積雪草總苷元中羥基積雪草酸含量的測(cè)定 |
方法原理： |
本品用甲醇溶解，經(jīng)液相色譜儀分離，在204nm測(cè)定峰面積，按標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算含量。 |
儀器設(shè)備及實(shí)驗(yàn)條件： |
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儀器設(shè)備 美國(guó)Waters公司生產(chǎn)的高效液相色譜系統(tǒng)，配Waters 515型泵、996型二極管陣列檢測(cè)器；Agilent1100型液質(zhì)聯(lián)用儀 (LC-MSD ) 。 | 色譜條件 色譜柱： Agilent Zorbax SB-C18柱( 150mm×4.6 mm，5 μm ) ；保護(hù)柱： Shimadzu Shim –packODS；流動(dòng)相：甲醇-水(體積比為65∶35，含4mmol /L β-CD ，以乙酸調(diào)節(jié)pH值為4)；流速0.4mL /min；檢測(cè)波長(zhǎng)：204nm；柱溫：25℃；進(jìn)樣量：10μL。 |
試樣制備： |
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對(duì)照品溶液制備 精密稱取羥基積雪草酸對(duì)照品 10.0 m g,用甲醇配制成10.0 g /L的溶液，然后用甲醇進(jìn)行倍比稀釋，配成質(zhì)量濃度依次為 5.0，2.0，1.0， 0.5和 0.1g /L的羥基積雪草酸對(duì)照品甲醇溶液，以峰面積( y )對(duì)質(zhì)量濃度 ( x，g /L )進(jìn)行線性回歸，羥基積雪草酸的回歸方程為 y = 116.54x – 10.058， r2=019989。結(jié)果表明。樣品量在 0.1～5.0 g /L范圍內(nèi)濃度與峰面積呈線性關(guān)系。 | 供試品溶液的制備 精密稱取50%積雪草總苷元適量，置于10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，配制成50%積雪草總苷元甲醇溶液5.58 g /L 備用，。進(jìn)樣前用0.45μm 微孔濾膜過(guò)濾。 |
操作步驟： |
精密吸取供試品溶液10μl，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，以標(biāo)準(zhǔn)曲線法法計(jì)算羥基積雪草酸含量。 |
附件： |
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備注： |
采用在甲醇-水流動(dòng)相中添加β-環(huán)糊精的方法分離了羥基積雪草酸和其同分異構(gòu)體termi-nolic acid,并測(cè)定了50%積雪草總苷元中羥基積雪草酸的含量。 |
參考文獻(xiàn)： |
潘見(jiàn)，開(kāi)桂青，袁傳勛.β-環(huán)糊精流動(dòng)相添加劑法分離測(cè)定積雪草總苷元中的羥基積雪草酸. 色譜.2007，25（3)：316～318 |
