香連丸—黃連的測(cè)定—薄層掃描法

本方法采用薄層掃描法測(cè)定香連丸中黃連的含量。

本方法適用于香連丸中黃連含量的測(cè)定。

供試品于索氏提取器中經(jīng)鹽酸-甲醇混合溶液適量加熱回流提取，過(guò)濾，濾液加甲醇定量稀釋?zhuān)�制成供試液，鹽酸小檗堿對(duì)照品加甲醇溶解并定量稀釋。點(diǎn)樣、展開(kāi)，以甲苯-乙酸乙酯-異丙醇-甲醇-水（4：2：1：1：0.2)為展開(kāi)劑，在另一槽中加入濃氨試液，欲飽和15分鐘，展開(kāi)，展距10cm，取出，涼干，用薄層掃描儀進(jìn)行熒光掃描，于激發(fā)波長(zhǎng)λ=366nm，測(cè)得供試品熒光強(qiáng)度的積分值與對(duì)照品熒光強(qiáng)度的積分值，計(jì)算其含量。

1 .甲醇

2 .甲苯

3 .乙酸乙酯

4 .異丙醇

5. 濃氨試液

1 儀器

1.1索氏提取器

1.2薄層掃描儀

1.3涂布器

應(yīng)能使吸附劑在玻璃板上手工或自動(dòng)涂成一層符合厚度要求的均勻薄層。

1.4點(diǎn)樣器

一般采用微升毛細(xì)管或與之相應(yīng)的點(diǎn)樣器材。

1.5展開(kāi)室

可用適合薄層板大小的專(zhuān)用玻璃缸，底部雙槽，蓋子須密閉。

2 材料

2.1玻板

用10cm×10cm、10cm×15cm、20cm×10cm或20cm×20cm的規(guī)格，要求光滑、平整，洗凈后不附水珠，晾干。

2.2吸附劑

硅膠G，其顆粒大小一般要求直徑為10～40μm。

1. 對(duì)照品溶液的制備

精密稱(chēng)取鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，加甲醇制成每1mL含0.02mg溶液，作為對(duì)照品溶液。

2. 供試品溶液的制備

取供試品，研碎，精密稱(chēng)取約0.2g，置索氏提取器中，加鹽酸-甲醇（1：100)適量，置索氏提取器中，加鹽酸-甲醇（1：100)混合液適量，加熱回流提取至提取液無(wú)色，提取液移至100mL量瓶中，用少量鹽酸-甲醇（1：100)混合液洗滌容器，洗液并入同一量瓶中，加混合液至刻度，精密量取10mL，置50mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，作為供試品溶液。

注：“精密稱(chēng)取”系指稱(chēng)取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所稱(chēng)取重量的千分之一�！熬�密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)該體積移液管的精度要求。

1. 薄層板制備

將吸附劑1份和水3份在研缽中向一方向研磨混合，去除表面的氣泡后，倒入涂布器中，在玻板上平穩(wěn)地移動(dòng)涂布器進(jìn)行涂布（厚度為0.25～0.5mm)取下涂好薄層的玻板，于室溫下，置水平臺(tái)上晾干，在反射光及透射光下檢視，表面應(yīng)均勻，平整，無(wú)麻點(diǎn)、無(wú)氣泡、無(wú)破損及污染，于110℃烘30分鐘，冷卻后立即使用或置干燥箱中備用，或用商品預(yù)制板。

2. 點(diǎn)樣

精密吸取供試品溶液 2μL、對(duì)照品溶液 1μL與 4μL，分別交叉點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，如用點(diǎn)樣器點(diǎn)樣到薄層板上，一般為圓點(diǎn)，點(diǎn)樣基線距底邊1.0～1.5cm，樣點(diǎn)直徑一般不大于2mm，點(diǎn)間距離可視斑點(diǎn)擴(kuò)散情況以不影響檢出為宜。點(diǎn)樣時(shí)必須注意勿損傷薄層表面。

3, 展開(kāi)

將點(diǎn)好樣品的薄層板放入展開(kāi)缸的展開(kāi)劑中，以甲苯-乙酸乙酯-異丙醇-甲醇-水（4：2：1：1：0.2)，展開(kāi)，取出，晾干。

4. 含量測(cè)定

在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周?chē)�用膠布固定，選擇反射方式，采用吸收法，進(jìn)行掃描，波長(zhǎng)：λs=530nm，λ_R=680nm，測(cè)量供試品吸收度積分值與對(duì)照品吸收度積分值，計(jì)算。

中華人民共和國(guó)藥典，國(guó)家藥典委員會(huì)編、化學(xué)工業(yè)出版社，2005年版，一部p.521。