方法名稱： |
香連丸－小檗堿的測定－薄層掃描法 |
應(yīng)用范圍： |
本方法采用薄層掃描法測定香連丸中小檗堿的含量。 本方法適用于中成藥香連丸的測定。 |
方法原理： |
供試品于索氏提取器中經(jīng)鹽酸-甲醇加熱回流，過濾，濾液蒸干，并用鹽酸-甲醇稀釋，制成供試液。點樣、展開，用薄層掃描儀進(jìn)行掃描，于波長λS=350nm，λR=365nm測量鹽酸小檗堿吸收度積分值，計算其含量。 |
試劑： |
1. 鹽酸 2 .甲醇 3 .苯 4.醋酸乙酯 5.異丙醇 6.氨水 |
儀器設(shè)備： |
1儀器 1.1薄層掃描儀 1.2涂布器 應(yīng)能使吸附劑在玻璃板上手工或自動涂成一層符合厚度要求的均勻薄層。 1.3點樣器 一般采用微升毛細(xì)管或與之相應(yīng)的點樣器材。 1.4展開室 可用適合薄層板大小的專用玻璃缸，底部平底或雙槽，蓋子須密閉。 2材料 2.1玻板 用10cm×10cm、10cm×15cm、20cm×10cm或20cm×20cm的規(guī)格，要求光滑、平整，洗凈后不附水珠，晾干。 2.2吸附劑 硅膠G其顆粒大小一般要求直徑為10～40μm。 |
試樣制備： |
1.對照品溶液的制備 精密稱取干燥至恒重的鹽酸小檗堿對照品適量，加鹽酸-甲醇(1:100)溶解并配成濃度為14.4，28.8，43.2，57.6，72.0，86.4，115.2，161.1μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。 2.供試品溶液的制備 精密稱取香連丸適量（相當(dāng)于黃連0.1g)置100mL量瓶中，加鹽酸-甲醇（1：100)95mL，60℃水浴溫浸30min，強(qiáng)超聲處理1h，室溫放置24h，加鹽酸-甲醇（1：100)定容于5mL量瓶中，作為供試品溶液。 注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所稱取重量的千分之一�！熬芰咳 毕抵噶咳◇w積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國家標(biāo)準(zhǔn)中對該體積移液管的精度要求。
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操作步驟： |
1薄層板制備 將吸附劑1份和水3份在研缽中向一方向研磨混合，去除表面的氣泡后，倒入涂布器中，在玻板上平穩(wěn)地移動涂布器進(jìn)行涂布（厚度為0.25～0.5mm)取下涂好薄層的玻板，于室溫下，置水平臺上晾干，在反射光及透射光下檢視，表面應(yīng)均勻，平整，無麻點、無氣泡、無破損及污染，于110℃烘30分鐘，冷卻后立即使用或置干燥箱中備用，或用商品預(yù)制板。 2點樣 2.1對照品點樣 各吸取標(biāo)準(zhǔn)系列濃度的鹽酸小檗堿溶液1μL點于同一硅膠G薄層板上，如用點樣器點樣到薄層板上，一般為圓點，點樣基線距底邊1.0～1.5cm，樣點直徑一般不大于2mm，點間距離可視斑點擴(kuò)散情況，以不影響檢出為宜。點樣時必須注意勿損傷薄層表面。 2.2供試品點樣 精密吸取69.2μg/mL供試品溶液和161.2μg/mL對照品溶液各1μL，分別交叉點于同一硅膠G薄層板上，如用點樣器點樣到薄層板上，一般為圓點，點樣基線距底邊1.0～1.5cm，樣點直徑一般不大于2mm，點間距離可視斑點擴(kuò)散情況，以不影響檢出為宜。點樣時必須注意勿損傷薄層表面。 3展開 將點好樣品的薄層板放入展開缸的展開劑中，以苯-醋酸乙酯-異丙醇-甲醇-濃氨水（46:15:12:5:4滴)為展開劑，上行展開揮干溶劑后測定。 4含量測定 4.1標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定，進(jìn)行熒光掃描測定，激發(fā)光波長343nm，測量對照品熒光強(qiáng)度，以鹽酸小檗堿點樣量(μg)對熒光強(qiáng)度積分值回歸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 4.2供試品測定 在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定，進(jìn)行熒光掃描測定，激發(fā)光波長343nm，測量供試品熒光強(qiáng)度，計算含量。 |
參考文獻(xiàn)： |
張小榮，刑黎明，王蘭，等. 熒光薄層法測定香連丸中小檗堿.西北藥學(xué)雜志，1998,13(6):284 |
