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1.1 標本來源及分組
本院2004年12月～2006年6月經(jīng)手術(shù)切除的NSCLC患者(男39，女17)標本56例作為NSCLC組，年齡36～69(56.5±11.5)歲。其中鱗癌30例，腺癌26例(包括肺泡細胞癌4例)。TNM Ⅰ期20例，Ⅱ期12例，Ⅲ期21例，Ⅳ期3例。有肺門、縱隔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移22例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移34例。另隨機選取同期因外傷或其他良性病變行肺葉切除術(shù)患者的正常肺組織標本27例(男20，女7)作為對照組，其中取自支氣管斷裂肺挫裂傷5例，肺炎性假瘤6例，慢性肺膿腫3例，肺結(jié)核6例，肺良性腫瘤4例，氣胸3例。年齡25～64(50±16.85)歲。術(shù)后常規(guī)隨訪。兩組性別、年齡構(gòu)成差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，具有可比性。
1.2 主要試劑
兔抗人多克隆抗Ⅷ因子抗體、兔抗人單克隆抗LRP抗體、兔抗人多克隆抗VEGF抗體、DAB顯色試劑盒等均購自福州邁新公司。
1.3 方法
按照產(chǎn)品說明書進行SP免疫組織化學染色：每組實驗均設有陽性和陰性對照。陽性對照為福州邁新公司提供的含已知待檢抗原的切片;陰性對照在上述操作過程中以PBS緩沖液代替一抗。
1.4 結(jié)果判定
1.4.1 MVD
用抗Ⅷ因子抗體標記血管內(nèi)皮細胞，可見呈棕色或棕黃色染色的血管內(nèi)皮細胞，先在低倍鏡(4×15)下觀察確定微血管數(shù)量最多的部位，再在高倍鏡(10×15)下以與周圍細胞和結(jié)締組織成分有明顯區(qū)別的任何一個陽性染色的內(nèi)皮細胞或細胞叢為一個血管，只要結(jié)構(gòu)不相連，其分支結(jié)構(gòu)也計作一個血管。腫瘤內(nèi)硬化區(qū)及與腫瘤交界處軟組織內(nèi)的微血管、有厚的平滑肌及管腔直徑大于8個紅細胞的血管除外。高倍鏡下分別計數(shù)3個視野，取其平均值即為平均MVD。
1.4.2 VEGF表達
細胞質(zhì)呈現(xiàn)棕黃色顆粒狀染色，且著色明顯高于背景或背景不著色而細胞著色者為陽性。按染色強度(未著色、弱、中、強)及陽性細胞的百分數(shù)(0%，1～25%，26～50%，>50%，)分別積分為0、1、2、3，兩項分數(shù)之和為0～2分者計為VEGF表達陰性，3～6分者計為VEGF表達陽性。
1.4.3 LRP表達
結(jié)果判定同VEGF。
1.5 統(tǒng)計學處理
采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析，多組間均數(shù)比較采用方差分析，兩兩比較采用最小顯著差異t檢驗，方差不齊時采用非參數(shù)檢驗，計數(shù)資料采用χ2檢驗。檢驗水準α=0.05。
2 結(jié) 果
2.1 LRP、VEGF蛋白和MVD的表達情況
LRP和VEGF的陽性表達主要分布于細胞漿內(nèi)，細胞核未見表達。在對照組的表達主要分布于間質(zhì)細胞的胞質(zhì)內(nèi)，偶見吞噬細胞內(nèi)的陽性表達(圖1)。
2.2 LRP、VEGF表達和MVD與病理特征的關(guān)系
與對照組比較，LRP在NSCLC組織的表達明顯升高(P<0.01)，G1+G2、G3與對照比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05，P<0.01)。VEGF在NSCLC表達高于對照(P<0.01)，G1+G2、G3與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01，P<0.05)。在MVD的比較上，NSCLC組明顯高于對照組(P<0.01);G1+G2、G3與對照比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。
LRP、VEGF、MVD各自在不同病理類型、病理分級之間的比較無統(tǒng)計學差異(P>0.05，表1)。表1 LRP、VEGF表達和MVD與臨床病理的關(guān)系(略)注：P均為與對照組比較結(jié)果。
2.3 LRP、VEGF表達和MVD與臨床特征之間的關(guān)系
VEGF表達在不同TNM分期中有非常顯著性差異(P<0.01)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的VEGF表達陽性率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(P<0.05)。MVD在Ⅲ+Ⅳ期明顯高于Ⅰ期(P<0.05);有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的MVD高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P<0.05);兩年存活的MVD低于兩年死亡的MVD(P<0.01)。LRP的表達在不同性別、TNM分期、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及兩年生存率的比較上均無明顯統(tǒng)計學意義(P>0.05);VEGF表達在不同性別、兩年生存的比較上無統(tǒng)計學意義(P>0.05);MVD與不同性別無明顯相關(guān)性(P>0.05，表2)。表2 LRP、VEGF表達和MVD與臨床特征的關(guān)系(略)注：TNM分期中LRP和VEGF的P值為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ+Ⅳ期的比較;MVD的P值為Ⅰ與Ⅲ+Ⅳ期的比較醫(yī).學全.在.線網(wǎng)站quanxiangyun.cn。
2.4 LRP、VEGF蛋白表達和MVD之間的關(guān)系
LRP表達的肺癌組織中MVD為17.8±5.1，與不表達肺癌組織中MVD13.7±4.3比較，兩者差異性顯著(P<0.01)。MVD在VEGF表達陽性的肺癌組織中為16.8±4.7，在VEGF陰性的肺癌組織中MVD為13.0±4.1，兩者間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。在非小細胞肺癌組織標本中LRP與VEGF表達相關(guān)(P<0.05)。
3 討 論
NSCLC對常用化療藥物耐藥是影響化療效果和患者生存率的重要原因之一，也是困擾人們的一大難題。多種因素、多個基因及蛋白參與了NSCLC的耐藥，包括LRP和VEGF等[1-2]。
LRP是一種僅表達于細胞胞質(zhì)[3]且在肺癌組織中有較高陽性率的耐藥蛋白[4]。LRP的主要作用是清除外源性毒性物質(zhì)，保護機體免受損害，其作用機制為：阻止以細胞核為靶點的藥物進入細胞核，并將藥物轉(zhuǎn)運到細胞質(zhì)的囊泡中，以胞吐的方式排出細胞[5]。在NSCLC組織中LRP陽性表達與腫瘤耐藥[1]和預后不良密切相關(guān)[2]。國內(nèi)學者[6]采用免疫組化法檢測NSCLC組織，發(fā)現(xiàn)LRP表達率為67.1%。本研究證實LRP僅在NSCLC的胞質(zhì)內(nèi)表達，陽性率為66.1%，細胞核未見表達。與對照肺組織比較，LRP在NSCLC組織的表達明顯升高(P<0.01)，在腺癌、鱗癌的表達均增高(P<0.01，P<0.05)。有學者[7]證實LRP在肺鱗癌中的表達強度低于腺癌，并認為其可能是臨床上鱗癌較腺癌對化療敏感、療效較好的原因。本研究未能證實LRP高表達與NSCLC不同病理類型相關(guān)。有研究[6]發(fā)現(xiàn)LRP表達與組織學分級有關(guān)，即低分化者高表達，高分化者低表達;也有研究[7]提示LRP在中高分化癌組織中明顯高于低分化者。本研究結(jié)果提示LRP在NSCLC不同病理分級間的表達無統(tǒng)計學差異(P>0.05)，因此推測腫瘤耐藥與腫瘤分化程度無明顯相關(guān)性。本研究還發(fā)現(xiàn)LRP的表達與性別、TNM分期、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及兩年生存率均無關(guān)(P>0.05)，提示臨床分期、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、患者性別等與NSCLC耐藥無密切關(guān)系，與已有報道[7]一致。
