藥理學實驗的基本知識和技術
一、實驗動物的捉拿、固定及給藥方法
1.小白鼠:右手抓住鼠尾,放在臺上或鼠籠蓋鐵絲網下,然后用左手拇指沿其背部向前抓住其頸部皮膚,并以左手的小指和掌部夾住其尾固定在手上。另一抓法是只用左手,先用食指和拇指抓住小鼠尾尖,后用手掌及小指夾住其尾巴,再以拇指及食指捉住其頸部皮膚。前一方法易學,另一方法稍難,但便于快速捉拿給藥。
小鼠灌胃(ig)法:將小鼠固定后,右手持裝有灌胃器的注射器,自口角外插入口腔,沿上顎插入食道。如遇阻力,可將注射器拔出再插,以免穿破食道或誤入氣管,造成動物死亡。灌胃容量一般為0.1—0.2ml/10g,不超過0.5ml/只。
小鼠皮下注射(sc)法:兩人合作,一人一手抓住小白鼠頭部皮膚,另一手抓住鼠尾。另一人注射藥物。注射部位在背部皮下組織。如一人操作時,左手抓鼠尾,讓鼠爬在鐵絲籠上,右手將抽好藥液的注射器針頭插入背部皮下組織。如一人操作時,左手抓鼠尾,讓鼠爬在鐵絲籠上,右手將抽好的藥液的注射器針頭插入背部皮下將藥注入。注射量不超過0.5ml/只。
小鼠腹腔注射(ip)法:左手持鼠,右手持注射器從下腹左或右側(避開膀胱)朝頭部方向刺入,宜先刺入皮下,經2—3mm再刺入腹腔,此時針頭與腹壁的角度約45度。針尖插入不宜太深或太近上腹部,避免刺破內臟,注射量一般為0.1—0.25ml/只。
小鼠尾靜脈注射法(iv):將小鼠置于固定器內,使其尾巴露出,用70%酒精擦尾部,或將鼠尾浸入50℃熱水中。待尾部靜脈擴張后,左手拉尾,右手進針。注射容量不超過0.5ml/只。
2.兔:用手抓起它脊背近后頸處皮膚,抓的面積越大其持重點越分散。如家兔肥大,應再以另一手托住它的臀部,將持重點承托于手上。
將兔作仰臥位,一手仍抓住頸部皮膚,另一手順其腹部撫摸至膝關節(jié),壓住關節(jié)。另一人用繩帶捆綁四肢,使兔腹部向上,固定在兔手術臺上。頭部則用兔頭固定夾固定。
兔灌胃法:二人合作,一人固定家兔于兩膝之間,一手固定兔頭,使頭部后仰,另一手將開口器插入兔口,并向后翻轉數次,使兔舌伸直并壓在開口器下面。另一人將胃管從開口器中央孔也插入口內緩慢插入食道和胃。插管時感覺順利,動物不掙扎,也不屏氣,表示胃管在胃內,為慎重起見,將胃管外端放入水中,當兔呼氣時,未見氣泡出現,即證實胃管在胃內,然后將藥液緩緩經胃管注入。灌胃容量一般為10ml/kg。
兔耳靜脈注射法:兩人合作,一人固定兔身及兔頭,一人將兔耳后緣之毛拔去,顯露耳緣靜脈,用手指輕彈耳殼,使血管擴張。助手左手指壓住耳緣靜脈根部,待血管明顯充血后,將抽好藥液的注射器從靜脈近耳尖處插入血管。針頭刺入血管以后,以左手拇指和食指將針頭與兔耳固定,不讓針頭滑動。放開耳根靜脈手指壓力,即可注入藥液,若針頭確實在血管內,則推藥通暢無阻力,并見血液被藥液沖走,如沆入皮下則耳殼腫脹、推注不順,需拔出重新注射。注射守畢,用手指按在針眼上,然后將針尖抽出,并繼續(xù)用手指或加棉球輕輕按壓2—3分鐘,以防出血,注射量0.5—2.5ml/kg。
3.大白鼠:以左手或持夾子抓住鼠尾,左手戴防護手套或用厚布蓋住鼠身作防護,握住其整個身體,并固定其頭骨,防止被咬傷,注意不要握力過大,勿捏其頸部以免窒息致死,根據實驗需要可指定于大鼠固定籠內或用繩綁其四肢,固定于大鼠手術臺上。
大白鼠灌胃、腹腔注射、靜脈注射均可一人操作,基本方法與小鼠相似。也可將大鼠腹股溝切開,從股靜脈注射藥物,也可從外頸靜脈插管給藥(麻醉后)。
二、藥理實驗設計的基本原則
重復:重復的醫(yī)學招聘網目的是看實驗結果的重現率,重現率越高,實驗的可信性就越好。重現率在95%以上者,可認為實驗相當可靠,兩藥平均值或效率的差別有顯著意義,并用“P(機率)<0.05”來表示,意即指:“不能重現的可能性小于5%”,如重現率在99%以上者可信為實驗非?煽,可做出“差別有非常顯著意義”的結論并用“P<0.01”來表示;重現率小于95%者,說明重復同樣實驗100次,將有5次以上機會出現相反的結果,固此認為兩藥的差別可能是個體差異而造成的,統(tǒng)計學上可做出“兩組差別并無統(tǒng)計學意義”的結論,并以P>0.05來表示。但這種結論并不意味著兩組無差別。一般可在檢查原因后,改進實驗條件,增加實驗例數,還有可能提高實驗的重現率,達到統(tǒng)計學上有顯著意義的水平。實驗結果的實際價值,不但需從統(tǒng)計結論來看,還應從專業(yè)角度來看。在統(tǒng)計學上都是達到P<0.05的水平,實驗例數多者并不一定比例數少者更有價值。但為了作出正確的結論,根據實驗設計中的重復原則,對各類動物的重復數,可提出一個大體范圍,以供實驗設計參考。
2.對照:對照是比較的基礎,沒有比較就沒有鑒別,也就談不上科學性。對照應符合“齊同可比”原則,除了所研究的因素(藥物)外,其他條件各組也應一律“齊同”。如動物的性別、年齡、體重。一般健康狀況等,也應基本一致,只有這樣才能具備“可比性”。所以實驗設計必須設立對照組。對照組的類型有以下三種:
(1)陰性對照:包括①空白對照,即不給任何處理的正常動物作對照,較少用。②假處理對照,即除不用被研究的藥物外,對照組的動物重經受同樣的處理,如麻醉、手術、注射不含藥物的溶媒等。這種對照的可比性好,較常用。
(2)陽性對照:包括①標準品對照,即以典型藥物劃標準品作為對照,以便評定藥物的作用強度。②弱陽性對照,即以藥效較弱的老藥作為對照。如果新藥優(yōu)于老藥,并有顯著意義,則可肯定新藥的價值。
3.隨機:隨機就是使每一個體在實驗中都有同等的機會,隨機遇而分組或接受處理。隨機可減少許多難以控制的干擾因素,消除偏差。
藥理實驗常用符號
度量衡及劑量符號
L(l),升 | dl, 分升(10-1L) |
ml,毫升(10-3L) | μl,, 微升(10-6L) |
kg,千克(公斤) | g, dq (10-3kg) |
mg,毫克(10-3g) | μg,, 微克(10-6g) |
ng,納克(10-9g) | pg, 皮克(10-12g) |
mol,摩爾 | mmol, 毫摩爾(10-3mol) |
nmol,納摩爾(10-9 mol) | μmol, 微摩爾(10-6mol) |
cm ,厘米10-2m | m, 米 |
μm , 微米(10-6m) | mm, 納米(10-3m) |
mmHg, 毫米汞柱 | nm, 納米(10-醫(yī).學全在線9m) |
Pa,帕(1mmHg=133.3Pa) | MmH2O,毫米水柱 |
LD,致死量 | Kpa,千帕 |
MLD,最小致死量 | LD50,半數致死量 |
MED,最小有效量 | ED50,半數有數量 |
IU,iu,國際單位 | U,u,單位 |
M,克分子 | Ppm, 百萬分之一 |
mEq, 毫克當量 | N,當量 |
用 藥 途 徑 符 號
id(ID)皮內注射 | SC(iH),皮下注射 | ip(IP),腹腔注射 | im(IM),肌肉注射 |
iv(IV)靜脈注射 | Iv(IVgtt),靜脈滴注 | po(PO),口服,經口 | ig(IG)灌胃 |
其 他
♂,雄性 | ♀雌性 | X,均數 | SD,標準差 | SE,標準誤 | ±,加或減 |
>,大于 | <,小于 | Bp,血壓 | ECG,心電圖 | OD,光亮度 | |
wt,體重 | vol,容量 |