四、LB培養(yǎng)基
�。ㄒ�)液體LB培養(yǎng)基（Luria-Bertani培養(yǎng)基)
配制：取一1000ml的燒杯，將事先稱取好的試劑加入杯內(nèi)，加H2O約500～800ml攪拌使其溶解完全。用5N的NaOH調(diào)pH至7.0,加入H2O定容至1000ml。15磅高壓滅20min。
（二)瓊脂糖平板培養(yǎng)基
細(xì)菌培養(yǎng)用瓊脂（或瓊脂糖) 15g
液體培養(yǎng)基（如LB) ～1000ml
按濃度比例，將瓊脂加入液體培養(yǎng)基（如LB)中，稍加攪拌，用紗布或紙封好瓶口，15磅高壓滅菌20min。
五、小量質(zhì)粒提取主要液體
1．溶液Ⅰ
2．溶液Ⅱ
3．溶液Ⅲ（3mol/L醋酸鈉)
加熱溶解后，再用冰醋酸（約40ml)調(diào)pH至4.8，補(bǔ)足H2O至200ml。
六、雜交前處理
1．蛋白酶（Proteinawe K, Pro.K) 蛋白酶K主要用于雜交前標(biāo)本處理，其作用是使組織達(dá)到一定消化，利于檢測分子的穿透，從而提高檢測方法的敏感性，但各種組織在不同條件下消化程度不一，因此，具體應(yīng)用時，應(yīng)根據(jù)組織種類、溫度確定反應(yīng)時間及酶的濃度。過度消化可使組織形態(tài)結(jié)構(gòu)遭到明顯破壞，核酸分子也會受到影響。通常是將其配成儲備液（1mg/ml)，臨用前，再配成工作液（約0.025mg/ml)。配制方法：
精心稱藥，將二者充分混合后，分裝成小份，-20℃存放，用時再取出凍融，余者棄去。
（2)工作液（臨用前配)：
取儲備液（1mg/ml)按1：40稀釋，充分混合，即得約含Pro.K為25mg/ml的工作液。
�。�3)關(guān)于P-K緩沖液的配制：
稱取上述試劑，充分混合即可。
②1mol/L 的Tris-HCl(pH8.0)：
先將Tris于800ml ddH2O中溶解，用HCl將pH調(diào)至8.0,ddH2O定溶于1000ml，高壓滅菌，室溫備用即可。
③0.5mol/L的EDTA：
稱取EDTA溶于約600ml ddH2O中，常需60℃持續(xù)攪拌以助溶，滴加NaOH至pH接近8.0時，EDTA才開始溶解。待完全溶解后，冷卻至室溫，NaOH調(diào)pH至8.0,ddH2O定溶至1000ml，高壓滅菌，室溫備用。
2．甘氨酸
（1)1mol/L甘氨酸：
稱取甘氨酸75g溶于ddH2O或DEPC水中，最后補(bǔ)足ddH2O定容至1000ml，高壓滅菌備用。該液為儲備液，-20℃儲存。
（2)甘氨酸工作液（0.1mol/L)：
將二者按1：10比例稀釋，即得甘氨酸工作液。一般要求臨用前新鮮配制。
甘氨酸有終止蛋白酶K作用的作用，以防過度消化。
3．0.25%醋酸-0.25%醋酸酐
配制：按上述配方，先以少許DEPC水溶解NaCl，然后加入三乙醇胺及濃HCl。DEPC水定容至約1000ml(997.5ml)，臨用前，一邊搖動溶液一邊加入醋酸酐，充分混合。注意操作時避免濃HCl 濺出，最好在通風(fēng)條件下進(jìn)行。
生物體內(nèi)有些組織，如神經(jīng)組織中的蛋白質(zhì)，對帶負(fù)電荷的核酸探針較易吸附。經(jīng)該液乙�；幚砗�，可使切片標(biāo)本表現(xiàn)帶上負(fù)電荷，有排斥帶負(fù)電的核酸探針，減少非特異吸附，降低反應(yīng)背景的作用。
