三、HFRS動物模型的研究和應用
腎綜合征出血熱病毒（HFRSV)，屬布尼亞病毒科（Bungavividae)中的一個新屬，稱為漢坦病毒屬。自1978年南朝鮮李鎬汪首次以疫區(qū)黑線姬鼠肺分離到HFRSV（亦稱漢坦病毒Hantaan Virus,HTNV)后，對其動物模型進行了眾多的研究。
�。ㄒ�)HFRS感染動物模型
感染動物模型的亞臨床感染，亦無明顯病理變化，主要用于病毒分離和傳代。目前有：非疫區(qū)黑線姬鼠、大白鼠、長爪沙鼠、家兔等。
1．黑線姬鼠
非疫區(qū)黑線姬鼠是最早用于病毒分離和實驗研究的動物。據(jù)報道用各種途徑（肌肉、皮下、肺內(nèi)、鼻內(nèi)、或經(jīng)口)接種均可使黑線姬鼠感染。皮下和肺內(nèi)接種0.1ml漢坦病毒或待檢其其它材料后，10天左右肺部出現(xiàn)病毒，以后在腎、肝、頜下腺中可檢出病毒。約接種后20天，肺中病毒滴度最高，以后逐漸下降，但150天后仍可檢出。
黑線姬鼠為野生鼠類，常有野生嚙齒類病毒的污染，加之來源、人工飼養(yǎng)、繁殖等問題較難解決，因而使用受到一定限制。
2．大鼠成鼠
1981年Leepw等將朝鮮出血熱病毒接種到雌性、1月齡Wistar和Fisher大鼠。這是首次將該病毒接種于實驗大鼠，肌肉接種0.5ml漢坦病毒后14-65天，肺內(nèi)可發(fā)現(xiàn)其特異性抗原；接種后三周，血清中可檢出特異性抗體，除脾臟亦可查到特異抗原外，與黑線姬鼠臟器的抗原分布相同。
朝鮮出血熱病毒對實驗室大鼠的適應，提供了無野生嚙齒類病毒污染的實驗模型。現(xiàn)已應用于特異性藥物治療研究。
3．長爪沙鼠成鼠
1983年朱智勇等發(fā)現(xiàn)長爪沙鼠對HFRSV敏感。六種途徑（肺內(nèi)、皮下、腹腔、口腔、肌肉)接種，第1代即可感染，無需傳代適應；臟器內(nèi)檢出特異性熒光部位與黑線姬鼠相同。接種病毒后4天，肺組織中查見病毒抗原，5-7天過高峰，通常于10-14天消失。接種后8天，查到抗體，14天達高峰。長爪沙鼠可用多種宿主動物體內(nèi)HFRSV的分離，且在較短時間內(nèi)即可獲得毒株。而且，這些毒株可用于疫苗的研制。
4．家兔
HFRSV感染的家兔，與長爪沙鼠成鼠一樣，亦為無癥狀短期自限性隱性感染。不同來源的HFRSV，除口飼外，肌肉、腹腔、肺內(nèi)、皮下接種均可使家兔感染，并能在體內(nèi)連續(xù)穩(wěn)定地傳代，但不表現(xiàn)任何癥狀。接種后4天，有持續(xù)數(shù)天的病毒血癥，7-14天可在多種器官內(nèi)找到病毒抗原，以脾、小腸、胰腺中為明顯，肺、肝、腎等組織內(nèi)偶爾可見，8-9天抗原量最多，同時在血液中開始查到相應抗體，隨抗體效價增長體內(nèi)病毒抗原很快減弱，至第15天完全消失。
初步實驗表明，R3和76/118株都能使乳兔感染，其表現(xiàn)與成兔相似，全身多種臟器組織內(nèi)可檢出病毒抗原，但其熒光亮度更強，提示乳兔對HFRSV更敏感。醫(yī)學 全在.線提供www.med126.com
�。ǘ�)HFRS致病動物模型
致病動物模型為顯性感性甚至死亡，并伴有明顯病理改變。主要用于發(fā)病機理研究、藥物篩選等。目前有小白鼠乳鼠、大鼠乳鼠、裸鼠及環(huán)磷酰胺處理的金黃地鼠。
1．小鼠乳鼠
Tasi等報道了第一個致病動物模型，即新生小白鼠（2-4齡)。相繼發(fā)現(xiàn)CD-1、ICR、Balb/等品系乳鼠均對HFRSV敏感。顱內(nèi)、腹腔、肌肉、皮下接種均可使其感染。我們的研究發(fā)現(xiàn)：顱內(nèi)、腹腔聯(lián)合接種與單純顱內(nèi)接種，在發(fā)病時間、抗原分布上無明顯差別。但腹腔接種乳鼠發(fā)病時間要比腦腹聯(lián)合接種及單純腦內(nèi)接種平均遲4-5天。病毒抗原廣泛分布各臟器（腦、心、肝、脾、肺、腎、胸腺)，腦內(nèi)接種0.02ml經(jīng)乳鼠傳代適應的漢坦病毒76/118株（LD50、10-6·5/0.02ml)，乳鼠第7天開始發(fā)病，表現(xiàn)為蜷縮、活動減少、聳毛、弓背、尾強直、后肢麻痹，直致死亡，發(fā)病規(guī)律。
乳鼠現(xiàn)已成功地用于病毒分離、繁殖高滴度HFRSV，并被用于研究不同來源毒株的毒力及測定疫苗效力和安全性、篩選抗病毒藥物及研究發(fā)病原理。
2．大鼠乳鼠
Fishet大鼠（E344/N)出生后24小時內(nèi)，分別顱內(nèi)接種HFRSV76/118株和B-1株（分離自實驗室大鼠)，死亡率分別為18.8%、42.9％。腹腔分別接種上述兩種毒株，觀察至第50天，仍未見死亡。
3．金黃地鼠
每只地鼠腹腔一次注射200mg/kg環(huán)磷酰胺，48小時后，腹腔或皮下注射病毒懸液1ml，或腦內(nèi)接種0.05ml。絕大多數(shù)動物在感染后7-9天病死。在病死地鼠的各器官均發(fā)現(xiàn)有HFRS病毒抗原，并分離到病毒。各器官的病理變化酷似人體出血熱病變。
4．裸鼠
14-42天齡的CK-1無胸腺裸鼠，腦內(nèi)接種104·4PFU（0.02ml)漢坦病毒76/118株后40天，表現(xiàn)有體重減輕、活動減少、站立不穩(wěn)、嗜睡等，最后全部死亡。而其同齡同窩兔功能正常鼠不發(fā)病。
我們用乳鼠適應的漢坦病毒76/118株感染了21日齡NIH品系的無胸腺裸鼠，感染劑量2.5×105LD50，（腦腹聯(lián)合接種，0.02ml/腦，0.05ml/腹)。最早于第8天開始發(fā)病，表現(xiàn)為活動減少、互相抱團、食欲減退、體重減少、弓背、后肢麻痹，于20天內(nèi)全部死亡。而接種相同量病毒的同窩免疫功能正常鼠則不發(fā)病。腦、心、肝、脾、肺、腎均有特異抗原，腦內(nèi)抗原熒光最亮。初步觀察了人白細胞干擾素對裸鼠感染的保護作用，劑量為：20×106μ/kg，腹腔內(nèi)給藥，自病毒感染當天開始，連續(xù)用藥6天，發(fā)現(xiàn)治療組比對照組存活時間延長1.5-3天，進一步的研究正在進行中。
�。ㄈ�)靈長類和樹鼩
靈長類的研究尚無肯定的結果。
非洲綠猴、腦內(nèi)接種HFRSV后，觀察7周，未見臨床癥狀及病理變化。Amyx等發(fā)現(xiàn)獼猴和黑猩猩接種后，可有規(guī)律地出現(xiàn)短暫蛋白尿、病毒血癥，偶見痰質血癥。在日本，用HFRS病毒接種幼齡獼猴（Ｃynomolgus)后７周，可見有與HFRS病人相似的病理變化：腎、肺、脾、心臟和肝可見毛細血管擴張、部分臟器可見彌漫性血管內(nèi)凝血（DIC)、腎髓質集合管退行性變、感染3-4周有蛋白尿，并在組織中檢出抗原，但未觀察到臨床癥狀�？磥慝J猴可能有希望做為較好的致病研究模型。
國內(nèi)未志勇等將R3株病毒接種三只恒河猴（3～4歲)，研究HFRS病毒在猴體內(nèi)的分布、增殖和排出，研究結果表明，接種病毒后3～5天即出現(xiàn)病毒血癥，直至血液中檢出抗體前2天止，持續(xù)8天之久；猴產(chǎn)生抗HFRS抗體時間在接種后第14天，且IgG和IgM抗體同時出現(xiàn)；病毒血癥期直至產(chǎn)生抗體上，猴體內(nèi)各器官組織未發(fā)現(xiàn)病毒增殖。此時糞便和尿都未分離出HFRS病毒。從而可推測HFRS病毒在猴體內(nèi)增殖的部位可能是循環(huán)血細胞內(nèi)，這與近年來證明該病毒在病人血細胞內(nèi)增殖相符。
最近嚴玉辰等將A16株病毒接種于六只樹鼩，每只由皮下和腦內(nèi)混合接種10-1病毒懸液1ml。結果：1～2號樹鼩于接種后7天死亡，經(jīng)檢測臟器抗原皆陰性，死后查血清抗體陽性。3～6號樹鼩接種病毒后，經(jīng)2～4次尿抗體檢查均陰性，血清抗體皆陽性。接種病毒7天后，均有不同程度的體溫增高現(xiàn)象。其中5號樹鼩于接種病毒在9天死亡�？乖跇潼毰K器組織中的分布頗為廣泛，但1～2號小獸血中有抗體，臟器內(nèi)未檢出抗原，何種原因尚待研究。初步看來此種小獸對HFRS病毒較敏感，但非理想的敏感動物。其不同年齡、不同毒株、不同劑量的實驗，有待進一步深入研究。（本節(jié)常見病毒敏感動物的選擇資料由王晶翼同志提供)。
