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提高多肽穩(wěn)定性的途徑 |
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藥師輔導(dǎo):提高多肽穩(wěn)定性的途徑
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| 來源：醫(yī)學(xué)全在線 更新：2007-5-15 考研論壇 |
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（1） 通過基因工程手段替換引起多肽不穩(wěn)定的殘基或引入能增加多肽穩(wěn)定性的殘基，可提高多肽的穩(wěn)定性。
（2）化學(xué)修飾
研究最多的是PEG修飾。PEG是一種水溶性高分子化合物，在體內(nèi)可降解，無毒。PEG與多肽結(jié)合后能提高熱穩(wěn)定性，抵抗蛋白酶的降解，降低抗原性，延長體內(nèi)半衰期。選擇合適的修飾方法和控制修飾程度可體質(zhì)或提高原生物活性。
（3）添加劑
通過加入添加劑，如糖類、多元醇、明膠、氨基酸和某些鹽類，可以提高多肽的穩(wěn)定性。糖和多元醇在低濃度下迫使更多的水分子圍繞在蛋白質(zhì)周圍，因而提高了多肽的穩(wěn)定性。在凍干過程中，上述物質(zhì)還可以取代水而與多肽形成氫鍵來穩(wěn)定多肽的天然構(gòu)象，而且還可以提高凍干制品的玻璃化溫度。
（4）凍干
多肽發(fā)生的一系列化學(xué)反應(yīng)如脫酰胺、β-消⑺獾榷夾枰斡�，水还可以作为茰O從戀牧鞫唷Ａ磽�，水含量綑n涂墑茍嚯牡謀湫暈露壬�。因此，冻干可提高多肽的稳定性�?br> 多肽類藥物制劑研究常用的分析手段有：SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法、等到電聚焦電泳法、凝膠過濾層析法、反相液相層析法、紫外光譜法、熒光光譜法、紅外光譜法、圓二色性光譜法、量熱法以及生物活性測定法。這里僅介紹藥物制劑研究中常用的一種方法——醫(yī)學(xué)全在線quanxiangyun.cn
量熱法（Calorimetry）。
量熱法是通過測定樣品在受熱過程中的放熱和吸熱過程中的放熱和吸熱行為來研究樣品在受熱過程中的放熱和吸熱行為來研究樣品中各組份的相互作用及狀態(tài)變化的一種方法，常用的是差示掃描量熱法（Differentiat Scanning Calorinetry）。該方法廣泛用于多肽的熱穩(wěn)定性分析、各種添加劑對多肽結(jié)構(gòu)的影響、多肽與配基之間的相互作用等研究，還用于測定凍干物品的玻璃化溫度和共熔點。例如.Chan等用DSC研究了添加劑對rhDNase溶液熱變性的影響。蛋白質(zhì)濃度為10mg/ml,掃描速率為1.2C/ min。測得rhDNase在純水中的Tm=67.4C,Hm=18.0J/g。加入Ca2+有利于rhDNase的熱穩(wěn)定，加入Mg2+、Mn2+則不利于rhDNase的穩(wěn)定。當(dāng)CaDl2濃度為20-100mmol/L時，Tm=76.4℃，Hm=20-22J/g。CaDl2和乳糖對rhDNase的穩(wěn)定有符合作用。同時加50mmol/L CaDl2和100mg/ml乳糖，可使rhDNase的Tm值提高到76.4℃，Hm值到21.9J/g。Chang等用DSC測定了rhIL-lra制劑的玻璃化溫度、反玻璃化溫度和共熔點。冷凍蛋白制劑的各種物理變化，如玻璃化、反玻璃化和共熔點都會影響凍干過程。根據(jù)測定結(jié)果，作者確定了凍干溫度和升溫速度，僅用6個小時就完成凍干過程。
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