(一) 重量法 根據(jù)樣品中分離出的單質或化合物的重量測定所含成分的含量。根據(jù)被測組分分離方法的不同,可分為提取法、揮發(fā)法、沉淀法。 1.提取法用適宜的溶劑提取出樣品中的某種成分,再蒸去溶劑進行測定。例如胰酶中脂肪含量測定是用乙醚提取后揮散乙醚,殘渣在105℃干燥2hr稱重并計算。 2.揮發(fā)法是利用被測組分具有揮發(fā)性,或將它轉化為揮發(fā)性物質來進行含量測定的方法!盁胱茪堅睘橹苯訐]發(fā)法的一種特殊方式:“干燥失重”為間接揮發(fā)法。 3.沉淀法是利用沉淀反應,將被測組分轉化成難溶物,以沉淀形式從溶液中分離出來,然后經(jīng)過濾、洗滌、烘干或熾灼,最后稱重并計算其含量的方法。 根據(jù)樣品中某些成分與標準溶液能定量地發(fā)生酸堿中和、氧化還原或絡合反應等進行測定。如胰酶的淀粉酶測定是利用氧化還原反應,以淀粉為底物,經(jīng)淀粉酶水解后產(chǎn)生還原糖,在堿性溶液中還原糖又將斐林試劑中的CUZ+還原成Cu+,多余的Cu+在酸性溶液中與KI作用析出碘,然后用硫代硫酸納滴定所析出的碘,來推算糖的含量,進而標定淀粉酶的效價。又如L鹽酸精氨酸是用電位滴定法測定含量的。 (三)比色法 醫(yī)學.全.在.線網(wǎng)站quanxiangyun.cn 樣品與顯色劑可發(fā)生顏色反應,依顏色反應的強度測定含量。如蛋白質的含量測定,可利用蛋白質與雙縮脲試劑發(fā)生顏色反應,而進行定量測定。硫酸軟骨素的含量也是用比色法測定的,具體介紹如下。 本品系自豬的喉骨、鼻中骨、氣管等軟骨組織提取制得的酸性粘多糖。按干燥品計算,含氨基己糖以氨基葡萄糖計算,應不得少于24.0%。 本品采用Elson-Morgan色法測定含量,其基本原理為樣品先用鹽酸水解生成氨基己糖,然后在堿性條件下與乙酰丙酮反應,生成色原物質,再與對二甲氨基苯甲醛反應產(chǎn)生紅色,以鹽酸氨基葡萄糖為對照品,用比色法測定。 對照品溶液的制備精密稱取經(jīng)105℃干燥至恒重的鹽酸氨基葡萄糖0.1g,置l00ml量瓶中,加水溶解并稀釋至刻度,搖勻;精密量取10ml,置l00ml量瓶中,加水至刻度,搖勻。每1ml中含鹽酸氨基葡萄糖0.1mg。 供試品溶液的制備取本品約0.15g,精密稱定,置50ml量瓶中,加6mol/L鹽酸液使溶解,并稀釋至刻度,搖勻;精密量取5rrll置5Oml量瓶中,密塞,置水浴中水解2h,取出放冷,用氫氧化鈉溶液(1→5)中和至中性,加水至刻度,搖勻,用干燥濾紙濾過,棄取初濾液,保留續(xù)濾液備用。 測定法精密量取對照品與供試品溶液各1ml,各取2份,分別置4支具塞試管中,各加水至5ml;另取具塞試管一支,加水5ml作為空白,各加乙酰丙酮試液 1ml,搖勻,置水浴中(1ml后密塞),準確加熱25min,取出,用冰水迅速冷卻后,加無醛乙醇3m1,在6O℃水浴中保溫10min后,再加對二甲氨基苯甲醛試液1ml,強力振搖,并繼續(xù)在60℃水浴中保溫1h,立即用冷水冷卻至室溫,照分光光度法,在525nm的波長處分別測定對照品溶液與供試品溶液的吸收度,以兩份的平均值,按下式計算: (計算公式) 式中互為供試品溶液吸收度的平均值,s為對照品溶液吸收度的平均值,Ws為對照品溶液每lml中含鹽酸氨基葡萄糖的量(mg),W為供試品重量(mg), 0.8309為氨基葡萄糖與鹽酸氨基葡萄糖分子量的比值。本法專屬性強,操作簡便、結果穩(wěn)定。值得注意的是實驗中所用乙醇必須是無醛乙醇。否則,將影響測定結果的準確性。 (四)紫外分光光度法 樣品或轉化后的產(chǎn)物在某一波長處有最大吸收,在一定的濃度范圍內(nèi),其濃度與吸收度成正比,則可進行定量測定。如蛋白質在280nm左右有最大吸收,胰蛋白酶與底物N-乙酰-L酪氨酸乙酯作用后的產(chǎn)物在237nm處有最大吸收,根據(jù)其吸收度可進行定量。
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