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實(shí)用免疫細(xì)胞與核酸:第三節(jié) 在寄生蟲(chóng)學(xué)中的應(yīng)用

在寄生蟲(chóng)學(xué)中應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)方法,對(duì)于人體大多數(shù)寄生蟲(chóng)都較其他血清學(xué)方法敏感。圖象鮮明,易于觀(guān)察。在診斷方面,免疫熒光間接法最常用于檢查宿主的抗體?乖苽淙菀祝恍枰鞒汕衅、涂片或壓印片標(biāo)本,不需提純可溶性抗原;有些可溶性抗原固定于醋酸纖維濾紙上…

在寄生蟲(chóng)學(xué)中應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)方法,對(duì)于人體大多數(shù)寄生蟲(chóng)都較其他血清學(xué)方法敏感。圖象鮮明,易于觀(guān)察。在診斷方面,免疫熒光間接法最常用于檢查宿主的抗體?乖苽淙菀,只需要作成切片、涂片或壓印片標(biāo)本,不需提純可溶性抗原;有些可溶性抗原固定于醋酸纖維濾紙上,反應(yīng)后以熒光計(jì)讀數(shù),可以定量。

但是,對(duì)于血中缺乏抗體的寄生蟲(chóng)如皮膚利什曼病,則難以診斷。還有些寄生蟲(chóng)(如扁形蠕蟲(chóng))抗原性的變化,則需制備多種抗原。絲蟲(chóng)等有較強(qiáng)的抗原交叉性,解釋結(jié)果必須慎重。

一、血吸蟲(chóng)病

(一)抗原

可用尾蚴成蟲(chóng)。

1.尾蚴抗原將每毫升300條左右的尾蚴懸液與等量20%福爾馬林混合。作用5min后,用PBS洗滌離心2次,取尾蚴沉淀備用。在4保存。

2.成蟲(chóng)抗原  可將成蟲(chóng)制成切片,甲醇固定10min,低溫保存?zhèn)溆谩?/p>

(二)待檢血清

可按常規(guī)靜脈采血分離血清,也可自指尖或耳垂微量采血(約0.05ml),滴于優(yōu)質(zhì)濾紙上干燥,試驗(yàn)時(shí)用生理鹽水浸取可溶性免疫球蛋白成分。干燥于濾紙上的血樣,在室溫中(22~26℃)或普通冰箱中保存3個(gè)月以上,可以郵寄。

(三)熒光抗體

可用抗人IgG或IgM熒光抗體,其特異性需經(jīng)免疫電泳鑒定。

(四)檢查方法

1.尾蚴染色法可將抗原沉淀以白金耳挑取涂片,干燥后以甲醇固定10min。然后按常規(guī)間接法染色。

2.成蟲(chóng)染色法同一般切片間接法。

據(jù)報(bào)道,此法敏感性可達(dá)80%~98%。

二、瘧疾

免疫熒光間接法用于研究人和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物對(duì)瘧原蟲(chóng)感染的免疫反應(yīng),瘧疾流行病學(xué)調(diào)查和臨床診斷有很大的實(shí)用價(jià)值。

1.抗原標(biāo)本人瘧原蟲(chóng)標(biāo)本制備:采用多種瘧原蟲(chóng)混合抗原,制作涂片,甲醇或丙酮固定。要每個(gè)高位中視野含裂殖體總數(shù)約15個(gè)即可;蛴靡赘泻锏母鞣N瘧原蟲(chóng)感染的紅細(xì)胞。

雞瘧原蟲(chóng)抗原標(biāo)本制備:取感染瘧原蟲(chóng)后第9~11天之間的雞血制備血膜,貯于4℃或-20℃下,用前丙酮固定10min。

2.待檢血清采血方法同血吸蟲(chóng)法。

3.熒光抗體常用抗人IgG熒光抗體。

4.檢查方法待檢血清以1:20起始稀釋?zhuān)撮g接法染色,鏡檢。

5.結(jié)果判斷陽(yáng)性結(jié)果,人類(lèi)瘧原蟲(chóng)包涵體呈現(xiàn)明亮的黃綠色熒光。雞瘧原蟲(chóng)抗原主要顯示胞漿染色。1:16或1:20稀釋待檢血清陽(yáng)性時(shí),可以繼續(xù)稀釋作滴度檢查。低于1:20的結(jié)果無(wú)意義。用人類(lèi)瘧原蟲(chóng)多種混合抗原和單抗原,病人抗體染色效價(jià)可達(dá)1:65536,1:1024~1:4096者占1/3。以雞瘧原蟲(chóng)作抗原,效價(jià)最高1:640,以惡性瘧最高為1:150,間日瘧為1:40。

三、阿米巴病

用間接免疫熒光方法檢查阿米巴肝腔腫病人血清抗體,陽(yáng)性率可達(dá)90%~100%。血清抗體滴度在1:80或1:160有診斷意義。治療后抗體滴度下降。腸道阿米巴疾病陽(yáng)性率較低(59%~91%)。

四、錐蟲(chóng)病

用間接免疫熒光方法檢查各種錐蟲(chóng)病患者血清抗體,對(duì)于恰加斯氏。ǹ耸襄F蟲(chóng)所致)的血清抗體診斷,有高度的敏感性和特異性。用于檢查非洲錐蟲(chóng)病的陽(yáng)性率為85.9%(WHO,1976)。岡比亞錐蟲(chóng)和羅德西亞錐蟲(chóng)所致非洲昏睡病的血清抗體診斷,在檢測(cè)特異性抗體時(shí),同種抗原比異種抗原好,可達(dá)到最高的敏感性。

五、絲蟲(chóng)病

應(yīng)用絲蟲(chóng)成蟲(chóng)冰凍切片抗原作間接免疫熒光檢查適用多種絲蟲(chóng)病免疫診斷。很有價(jià)值。如魏氏棘唇線(xiàn)蟲(chóng)抗體陽(yáng)性率可達(dá)905。用作流行病學(xué)調(diào)查,可反映流行的準(zhǔn)確情況。已用于盤(pán)尾絲蟲(chóng)、班氏絲蟲(chóng)、犬惡絲蟲(chóng)、廣州管圓線(xiàn)蟲(chóng)等抗體的quanxiangyun.cn/wszg/檢測(cè)。

六、弓形蟲(chóng)病

已證實(shí)免疫熒光間接法檢查弓形蟲(chóng)抗體,是一種診斷弓形蟲(chóng)病的特異和敏感的方法,陽(yáng)性率可達(dá)98%。用死蟲(chóng)體作抗原很簡(jiǎn)便,檢查IgM抗體可診斷新生嬰兒先天性感染。

七、旋毛蟲(chóng)病

用旋毛蟲(chóng)冰凍切片作抗原,間接免疫熒光方法檢查病人血清抗體,很敏感、特異和經(jīng)濟(jì),節(jié) 省時(shí)間。

八、其他寄生蟲(chóng)病

已用間接免疫熒光方法對(duì)蛔蟲(chóng)病,弓蛔蟲(chóng)病,鉤蟲(chóng)病,線(xiàn)蟲(chóng)病,吸蟲(chóng)。ǚ挝x(chóng)和肝吸蟲(chóng))、絳蟲(chóng)病(包括囊蟲(chóng)病牛肉絳蟲(chóng)以及豬肉絳蟲(chóng))等進(jìn)行快速診斷,取得較好的結(jié)果。

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