動(dòng)脈粥樣硬化:第一節(jié)　受體與標(biāo)記配體的結(jié)合分析

為了體外研究脂蛋白的細(xì)胞代謝和脂蛋白受體活性，早在1974年Goldstein和Brown就建立了成纖維細(xì)胞¹²⁵I標(biāo)記LDL的配體-受體結(jié)合分析法。其基本原理是：用放射性同位素（常用¹²⁵I)標(biāo)記LDL后，與細(xì)胞（通常為培養(yǎng)的單層成纖維細(xì)胞)、組織或含有LDL-R的制劑一起孵育，使LDL-R與¹²⁵I-LDL充分結(jié)合，形成受體-配體復(fù)合物，再除去未結(jié)合的¹²⁵I-LDL，測(cè)定結(jié)合沉淀物中的放射性。同時(shí)檢測(cè)細(xì)胞、組織或受體制劑的蛋白質(zhì)含量，即可計(jì)算出與¹²⁵I-LDL結(jié)合的LDL-R量。本法由于使用同位素，采樣困難和操作過(guò)程繁瑣，且費(fèi)時(shí)、昂貴，故在臨床診斷上難以廣泛開(kāi)展。

Teupser等于1996年建立了直接熒光法檢測(cè)LDL-R，他們采用1，1’二（十八烷基)-3，3"，3"，3"-四甲基吲哚羰基花青高氯酸鹽（1,1"-diocquanxiangyun.cn/sanji/tadecy1-3,3,3"，3"-tetramethylindocarbocyanine perchlorate,DiI)標(biāo)記LDL，原理與同位素標(biāo)記LDL相同。其操作步驟見(jiàn)圖20-1。直接熒光法可定量檢測(cè)附著的或非附著的各種類型的培養(yǎng)細(xì)胞（如正常人或FH病人的皮膚成纖維細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、人U-937和鼠P388D1巨噬細(xì)胞系)的LDL-R和清道夫受體，其特點(diǎn)是特異性強(qiáng)，靈敏度高，不使用有機(jī)溶劑、不需預(yù)先進(jìn)行脂質(zhì)抽提，并省去了多步抽提步驟。正常人平均最大結(jié)合濃度為10.3±1.1μg/mg細(xì)胞蛋白，F(xiàn)H雜合子為5.2±0.8μg/mg細(xì)胞蛋白，F(xiàn)H純合子0.9±0.2μg/mg細(xì)胞蛋白。

圖20-1 直接熒光法測(cè)LDL-R操作步www.med126.com驟

亦有用膠體金標(biāo)記LDL的，但是在受體-配體結(jié)合分析法中，正常人與FH患者的測(cè)定值有較明顯的交叉現(xiàn)象，且操作比較繁瑣。

1987年Roach等比較了在硝化纖維素上用¹²⁵I-LDL、生物素-LDL、生物素-LDL、膠體金-LDL和膠體金-LDL結(jié)合銀染四種方法檢測(cè)LDL-R，發(fā)現(xiàn)膠體金-LDL結(jié)合銀染的方法最為敏感，且安全、簡(jiǎn)單、快速、便宜。比較結(jié)果見(jiàn)表20-1。

表20-1 硝化纖維上檢測(cè)LDL-R的幾種方法比較