隨著分子生物學(xué)的發(fā)展和脂代謝相關(guān)蛋白基因的克隆,序列測定及表達(dá)調(diào)控組件研究的深入,為探討載脂蛋白及其他脂代謝相關(guān)蛋白和AS的關(guān)系,以期建立As TGM模型奠定了基礎(chǔ),F(xiàn)已對ApoAⅠ、AⅡ、AⅣ、B、CⅠ、CⅢ、E和Apo(a),以及LDL-R、CETP、LRP及LPL等進(jìn)行了轉(zhuǎn)基因動物研究,先后建立了各種TGM模型。為深入了解脂蛋白運(yùn)輸基因如何調(diào)控以及高表達(dá)與低表達(dá)在調(diào)控脂蛋白代謝中的主要作用和為研究脂蛋白代謝紊亂及AS等提供更好的實(shí)驗(yàn)動物模型。臨床資料表明,脂蛋白代謝等紊亂與AS的敏感性密切相關(guān),特別是各種Apo基因異常表達(dá)引起的高脂血癥和AS以及各種Apo TGM在此領(lǐng)域的研究已是極其活躍與有價(jià)值。
Rubin等將人ApoA-Ⅰ基因?qū),C57BL/6這一鼠采用以評價(jià)轉(zhuǎn)基因?qū)︼嬍乘翧S的影響時(shí)發(fā)現(xiàn),表達(dá)人ApoA-Ⅰ的TGM其血漿所含人ApoA-Ⅰ和HDL濃度高于非轉(zhuǎn)基因C57BL/6小鼠,人ApoA-Ⅰ基因表達(dá)可減少動脈竇泡沫細(xì)胞損害區(qū)域,這表明ApoA-Ⅰ基因表達(dá)伴隨著HDL-C水平的提高可抑制AS的產(chǎn)生。因此,可應(yīng)用ApoA-ⅠTGM探索高膽固醇飲食或Probucol等降血脂藥物引起的HDL-C和ApoA-Ⅰ水平改變的機(jī)制。Williamson等發(fā)現(xiàn)ApoA-Ⅰ基因剔除鼠ApoA-Ⅰ水平低下并伴有HDL-C低下,而表達(dá)人ApoA-Ⅱ的TGM,其HDL-C并不增加,小鼠原有的ApoA-Ⅰ和A-Ⅱ也不減少。這也是臨床上所見到血漿Apo量與HDL-C之間無相關(guān)性的證據(jù)之一。研究TGM可發(fā)現(xiàn)ApoA-Ⅱ與影響HDL量的ApoA-Ⅰ不同,它主要影響HDL的質(zhì)。Schultz等將分別表達(dá)人ApoA-Ⅰ和A-Ⅱ的TGM雜交后發(fā)現(xiàn),同時(shí)表達(dá)ApoA-Ⅰ、A-Ⅱ基因的TGM抑制AS形成的能力弱。同時(shí)也說明并非所有HDL顆粒都有抗AS作用。
已有報(bào)道P1噬菌體文庫中分離出含有5’端(19kb)和3’端(14kb)側(cè)翼序列在內(nèi)的整個(gè)ApoB100基因(約43kb)的人ApoB克隆。將其導(dǎo)入小體內(nèi)發(fā)現(xiàn)這種TGM血漿中人ApoB100水平顯著增加。另外人ApoB100基因轉(zhuǎn)錄在小鼠體內(nèi)能被有效地剪輯。分析ApoBTGM脂蛋白譜發(fā)現(xiàn)與人相似,含有高水平LDL-C。這一模型有助于高膽固醇血癥與低β脂蛋白血癥等發(fā)病機(jī)理的研究。
研究ApoC-ⅢTGM發(fā)現(xiàn)小鼠血漿甘油三酯(TG)水平隨ApoC-Ⅲ轉(zhuǎn)基因的表達(dá)增加而增高,通常TG含量比正常小鼠高二倍以上。因此ApoC-ⅢTGM是第一個(gè)人為原發(fā)性高TG的動物模型。有推測認(rèn)為高TG血癥的形成,一是因?yàn)閂LDL在體內(nèi)滯留時(shí)間延長而非殘余顆粒累積所致,二是由于改變了Apo表面組成或/和游離脂肪酸升高所引起。這些研究提示ApoC-Ⅲ基因的表達(dá)能調(diào)節(jié)人體TG水平,人ApoC-Ⅲ基因過量表達(dá)促進(jìn)AS的形成。
Shimano等通過把大鼠ApoE基因與金屬硫蛋白啟動子一起導(dǎo)入小鼠體內(nèi),所制備的TGM血漿ApoE水平是正常對照組的4倍,并可觀察到VLDL和LDL-C的急劇下降。此外,這種TGM對飲食所致高膽固醇血癥具有耐受性。ApoE結(jié)構(gòu)基因位點(diǎn)存在多態(tài)性。在若干變異型易形成Ⅲ型高脂血癥(HLP),故這一模型期望能用于Ⅲ型HLP發(fā)病機(jī)理的研究。近年運(yùn)用基因打靶與基因剔除技術(shù)已成功地制備出一類新的ApoETGM模型。Plump等發(fā)現(xiàn)缺失ApoE基因的TGM血漿LDL和VLDL水平均顯著高于正常對照組,HDL水平則低于正常小鼠。Paszty等研究發(fā)現(xiàn),表達(dá)人ApoA-Ⅰ且HDL含量高的ApoE基因剔除小鼠比不表達(dá)人ApoA-Ⅰ且HDL含量低的ApoEquanxiangyun.cn/hushi/基因剔除小鼠難以形成AS。
Chiesa等通過把鼠轉(zhuǎn)鐵蛋白啟動子與Apo(a)cDNA相連接,導(dǎo)入小鼠體內(nèi)制成Apo(a)TGM。轉(zhuǎn)基因最初在肝臟表達(dá),并在腦、睪丸、心臟和腎臟中可檢出少量Apo(a)mRNA和蛋白質(zhì)。Apo(a)TGM動脈窒亦可見明顯損害,這提示Apo(a)本身就可致AS,其作用待探討。Callow等將過度表達(dá)ApoB的TGM與表達(dá)Apo(a)的TGM進(jìn)行雜交,制備出能同時(shí)表達(dá)人ApoB與Apo(a)的TGM。這種TGM能有效地裝配出與人血漿Lp(a)顆粒非常相似的Lp(a)分子。Liu等研究ApoA-Ⅰ與Apo(a)轉(zhuǎn)基因表達(dá)間的相互關(guān)系時(shí)發(fā)現(xiàn),僅表達(dá)Apo(a)的TGM與對照組小quanxiangyun.cn/job/鼠脂蛋白譜相似,而其對飲食誘導(dǎo)所致的AS敏感性顯著增加。同時(shí)表達(dá)Apo(a)與ApoA-Ⅰ的TGM其HDL濃度是僅表達(dá)Apo(a)的TGM的2倍,而其形成早期AS斑塊的可能性僅為前者的1/20。由于Lp(a)是AS發(fā)病的獨(dú)立危險(xiǎn)因子,而Apo(a)與纖溶酶原(PLG)具有高度同源性,故Apo(a)TGM是研究Lp(a)發(fā)病關(guān)聯(lián)方面非常有意義的動物模型。
糖尿病、腎病等疾病與心血管疾病并發(fā)癥密切相關(guān)。近年來有關(guān)這些疾病的轉(zhuǎn)基因動物模型也相繼建立。Allison等曾以大鼠的胰島素啟動子調(diào)節(jié)小鼠第一類組織相溶性抗原復(fù)合物(MHC-1)基因,在TGM的胰島β細(xì)胞表達(dá),引起胰島異常,胰島素分泌降低從而建立了胰島素依賴型糖尿病(IDDM)TGM模型。Marban等將8.8kb的胰島素基因注射到小鼠受精卵原核,培育出高胰島素血癥TGM模型。Mackey等報(bào)道用SV40早期區(qū)基因進(jìn)行轉(zhuǎn)基因動物研究,建立了腎小球硬化和腎囊腫TGM模型。Doi等通過生長激素和生長激素釋放因子的TGM研究,建立了進(jìn)行性腎小球硬化TGM模型等。隨著轉(zhuǎn)基因技術(shù)的不斷完善,人類疾病的的轉(zhuǎn)基因動物模型不斷涌現(xiàn),為攻克心血管疾病提供了可選擇性的動物模型與研究手段。