武漢大學(xué)微生物講義

實(shí)驗(yàn)二十 

[目的要求]

1.證明不同微生物對(duì)各種有機(jī)大分子的水解能力不同，從而說明不同微生物有著不同的酶系統(tǒng)。

2.掌握進(jìn)行微生物大分子水解試驗(yàn)的原理和方法。

[實(shí)驗(yàn)原理]

微生物對(duì)大分子的淀粉、蛋白質(zhì)和脂肪不能直接利用，必須靠產(chǎn)生的胞外酶將大分子物質(zhì)分解才能被微生物吸收利用。胞外酶主要為水解酶，通過加水裂解大的物質(zhì)為較小的化合物，使其能被運(yùn)輸至細(xì)胞內(nèi)。如淀粉酶水解淀粉為小分子的糊精、雙糖和單糖；脂肪酶水解脂肪為甘油和脂肪酸；蛋白酶水解蛋白質(zhì)為氨基酸等。

[教學(xué)內(nèi)容]

大分子物質(zhì)的水解試驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)二十一

[目的要求]

1.了解糖發(fā)酵的原理和在腸道細(xì)菌鑒定中的重要作用。

2.掌握通過糖發(fā)酵解釋的方法。

[實(shí)驗(yàn)原理]

糖發(fā)酵試驗(yàn)是常用的鑒別微生物的生化反應(yīng)，在腸道細(xì)菌的鑒定上尤為重要。絕大多數(shù)細(xì)菌都能利用糖類作為碳源和能源，但是它們?cè)诜纸馓穷愇镔|(zhì)的能力上有很大的差異。有些細(xì)菌能分解某種糖產(chǎn)生有機(jī)酸(如乳酸、醋酸、丙酸等)和氣體(如氫氣、甲烷、二氧化碳等)；有些細(xì)菌只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。例如大腸桿菌能分解乳糖和葡萄糖產(chǎn)酸并產(chǎn)氣；傷寒桿菌分解葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，不能分解乳糖；普通變形桿菌分解葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，不能分解乳糖。

[教學(xué)內(nèi)容]

糖發(fā)酵試驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)二十二

[目的要求]

了解IMViC與硫化氫反應(yīng)的原理及其在腸道菌鑒定中的意義和方法。

[實(shí)驗(yàn)原理]

IMViC是吲哚(Indol test)、甲基紅(Methyl red test)、伏-普(Voges-Prokauer test)和檸酸鹽(Citrate test)四個(gè)試驗(yàn)的縮寫，i是在英文中為了發(fā)音方便而加上去的。這四個(gè)試驗(yàn)主要是用來快速鑒別大腸桿菌和產(chǎn)氣腸桿菌(Enterobacter aerogenes)，多用于水的細(xì)菌學(xué)檢查。大腸桿菌雖非致病菌，但在飲用水中若超過一定數(shù)量，則表示受糞便污染。產(chǎn)氣腸桿菌也廣泛存在于自然界中，因此檢查水時(shí)要將兩者分開。

[教學(xué)內(nèi)容]

IMViC試驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)二十三

[目的要求]

    1. 了解微生物自動(dòng)鑒定系統(tǒng)的原理及其優(yōu)點(diǎn)

2. 學(xué)習(xí)與掌握Biolog自動(dòng)鑒定的方法

[實(shí)驗(yàn)原理]

要鑒定一種微生物，用傳統(tǒng)的方法需進(jìn)行大量的工作，其中微生物的生理生化反應(yīng)是重要的內(nèi)容之一，但所需時(shí)間很長(zhǎng)。幾十所來，根據(jù)微生物的主要生理生化特性相應(yīng)建立了許多自動(dòng)鑒定卡或板。迄今，借助計(jì)算機(jī)的快速發(fā)展又創(chuàng)建了不少的微生物自動(dòng)鑒定系統(tǒng)，包括自動(dòng)鑒定板（卡）、和數(shù)據(jù)庫(kù)兩大部份，這樣能很方便地將鑒定卡插入計(jì)算機(jī)，判別實(shí)驗(yàn)結(jié)果，并將其結(jié)果與數(shù)據(jù)庫(kù)中所收集的微生物信息進(jìn)行比較，很快便確定待測(cè)菌株的分類地位

[教學(xué)內(nèi)容]

Biolog微生物自動(dòng)鑒定系統(tǒng)

                         實(shí)驗(yàn)二十四

[目的要求]

1.了解常用化學(xué)消毒劑對(duì)微生物的作用。

2.學(xué)習(xí)測(cè)定石炭酸系數(shù)的方法。

[實(shí)驗(yàn)原理]

常用化學(xué)消毒劑主要有重金屬及其鹽類、酚、醇、醛等有機(jī)溶劑、鹵族元素及其化合物、染料和表面活性劑等。重金屬離子可與菌體蛋白質(zhì)結(jié)合而使之變性或與某些酶蛋白的巰基相結(jié)合而使酶失活；有機(jī)溶劑可使蛋白質(zhì)及核酸變性，也可破壞細(xì)胞膜透性使內(nèi)含物外溢；碘可與蛋白質(zhì)酪氨酸殘基不可逆結(jié)合而使蛋白質(zhì)失活，氯氣與水發(fā)生反應(yīng)產(chǎn)生的強(qiáng)氧化劑也具有殺菌作用；染料在低濃度條件下可抑制細(xì)菌生長(zhǎng)。

[教學(xué)內(nèi)容]

化學(xué)因素對(duì)微生物的影響

實(shí)驗(yàn)二十五

[目的要求]

了解某一抗生素的抗菌范圍，學(xué)習(xí)抗菌譜試驗(yàn)的基本方法。

[實(shí)驗(yàn)原理]

生物之間的關(guān)系從總體上可分為互生、共生、寄生、拮抗等，微生物之間的拮抗現(xiàn)象是普遍存在于自然界的，許多微生物在其生命活動(dòng)過程中能產(chǎn)生某種特殊代謝產(chǎn)物如抗生素，具有選擇性地抑制或殺死其它微生物的作用，不同抗生素的抗菌譜是不同的，某些抗生素只對(duì)少數(shù)細(xì)菌有抗菌作用。

[教學(xué)內(nèi)容]

生物因素對(duì)微生物的影響

實(shí)驗(yàn)二十六

[目的要求]

1.了解細(xì)菌接合導(dǎo)致傳遺重組的基本原理。

2.學(xué)習(xí)細(xì)菌接合實(shí)驗(yàn)的基本方法。

[實(shí)驗(yàn)原理]

細(xì)菌接合是指供體菌與受體菌的完整細(xì)胞在直接接觸時(shí)供體菌的DNA向受體菌單向傳遞而導(dǎo)致基因重組的現(xiàn)象。大腸桿菌的接合配對(duì)是由致育因子(F因子)的存在所決定的。

本實(shí)驗(yàn)采用的供體菌是大腸桿菌野生型Hfr菌株，對(duì)鏈霉素呈敏感性(Strs)，受體菌為大腸桿菌營(yíng)養(yǎng)缺陷型突變體(Thr- Leu- Thi-)，需要蘇氨酸，亮氨酸和硫胺素，對(duì)鏈霉素呈抗性(Strr)。短期接合配對(duì)以后，在含有鏈霉素和硫胺素的基本培養(yǎng)基上只能分離到蘇氨酸和亮氨酸的重組子(Thr+ Leu+Thi-)，硫胺素標(biāo)記位于轉(zhuǎn)移染色體的末端，在短期配對(duì)過程中因配對(duì)中斷難以轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞，因此硫胺素是Thr+ Leu+Thi-重組子的必須生長(zhǎng)因子。

[教學(xué)內(nèi)容]

細(xì)菌的接合作用

實(shí)驗(yàn)二十七

[目的要求]

學(xué)習(xí)噬菌體效價(jià)測(cè)定的基本方法。

[實(shí)驗(yàn)原理]

噬菌體的效價(jià)就是一毫升培養(yǎng)液中所含活噬菌體的數(shù)量。效價(jià)測(cè)定的方法，一般應(yīng)用雙層瓊脂平板法。由于在含有特異宿主細(xì)菌的瓊脂平板上，噬菌體產(chǎn)生肉眼可見的噬菌斑，因此，能進(jìn)行噬菌體的計(jì)數(shù)。但因噬菌斑計(jì)數(shù)方法其實(shí)際效率難以接近100%(一般偏低，因?yàn)橛猩贁?shù)活噬菌體可能未引起感染)，所以為了準(zhǔn)確地表達(dá)病毒懸液的濃度(效價(jià)或滴度)一般不用病毒粒子的絕對(duì)數(shù)量而是用噬菌斑形成單位(Plague-forming units,簡(jiǎn)寫成pfu)表示。

[教學(xué)內(nèi)容]

噬菌體效價(jià)的測(cè)定

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