| 公開(公告)號 | CN101134947A |
| 公開(公告)日 | 2008.03.05 |
| 申請(專利)號 | CN200710029308.9 |
| 申請日期 | 2007.07.24 |
| 專利名稱 | 一種胰島素分泌細(xì)胞的制備方法 |
| 主分類號 | C12N5/10(2006.01)I |
| 分類號 | C12N5/10(2006.01)I;C12N15/85(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 南方醫(yī)科大學(xué)珠江醫(yī)院 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 王海瀾;高 毅;蔣澤生 |
| 地址 | 510282廣東省廣州市工業(yè)大道253號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 廣州市天河廬陽專利事務(wù)所 |
| 代理人 | 胡濟(jì)元 |
| 國省代碼 | 廣東;44 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種胰島素分泌細(xì)胞的制備方法，該方法由以下步驟組成： (1)將密度為105～107個/ml的骨髓干細(xì)胞單細(xì)胞懸液接種于神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)基中培養(yǎng)6～8天，誘導(dǎo)為nestin+細(xì)胞； (2)將5-100μg含有PDX-1基因的重組真核表達(dá)載體通過細(xì)胞核轉(zhuǎn)染法引入到步驟(1)所得的nestin+細(xì)胞中； (3)將步驟(2)所得的轉(zhuǎn)染了PDX-1基因的nestin+細(xì)胞接種于添加了細(xì)胞因子和體積百分比為20％的胎牛血清的低糖DMEM中，在5％CO2、飽和濕度、37℃下培養(yǎng)2～15天，誘導(dǎo)分化為分泌胰島素的細(xì)胞；其中， 步驟(2)中所述的真核表達(dá)載體是pEGFP、pcDNA或pcMV5； 步驟(3)中所述細(xì)胞因子是在培養(yǎng)基中的終濃度為0.1～500nM的胰高血糖素樣肽-1；或者是在培養(yǎng)基中的終濃度為5～30mM的葡萄糖；或者是在培養(yǎng)基中的終濃度分別為0.1～500nM和5～30mM的胰高血糖素樣肽-1和葡萄糖的混合物。 |
| 摘要 | 本發(fā)明提供了一種胰島素分泌細(xì)胞，該細(xì)胞是由以下方法制備得到的：將骨髓干細(xì)胞在神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)基中預(yù)誘導(dǎo)為nestin+細(xì)胞，然后將含有PDX-1基因的真核表達(dá)載體通過細(xì)胞核轉(zhuǎn)染法引入到上述nestin+細(xì)胞中，最后用含有細(xì)胞因子和20％胎牛血清的低糖DMEM中培養(yǎng)誘導(dǎo)分化為分泌胰島素的細(xì)胞；所述的細(xì)胞因子為葡萄糖和胰高血糖素樣肽-1中的一種或兩種。本發(fā)明所述的胰島素分泌細(xì)胞能產(chǎn)生和分泌胰島素和C肽，可作為β細(xì)胞的替代物用于糖尿病的細(xì)胞治療或基因治療。 |
| 國際公布 |
