| 公開(公告)號 | CN100363500C |
| 公開(公告)日 | 2008.01.23 |
| 申請(專利)號 | CN200410027943.X |
| 申請日期 | 2004.07.07 |
| 專利名稱 | 重組人粒細(xì)胞集落刺激因子的制備方法 |
| 主分類號 | C12P21/02(2006.01)I |
| 分類號 | C12P21/02(2006.01)I;C12N1/20(2006.01)I;C07K14/525(2006.01)I;C07K1/34(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 深圳新鵬生物工程有限公司 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 李政海;胡家華;李繼東 |
| 地址 | 518057廣東省深圳市南山區(qū)高新技術(shù)園北區(qū)郎山二路 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機構(gòu) | 深圳市博銳專利事務(wù)所 |
| 代理人 | 張 明 |
| 國省代碼 | 廣東;44 |
| 主權(quán)項 | 一種重組人粒細(xì)胞集落刺激因子的制備方法，包括以下步驟： a.選用工程菌DH5α-PBV220-hGCSF菌株進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)； b.對發(fā)酵培養(yǎng)所得菌體進(jìn)行包涵體的分離和洗滌，得到精制包涵體； c.對精制包涵體進(jìn)行變性處理，得到變性所得物； d.將變性所得物以13000r/min離心40min，棄去沉淀，將上清緩慢倒入復(fù)性液中，控制蛋白濃度在0.05mg/ml，攪拌至少20小時，即為第一次復(fù)性所得物；所述復(fù)性液的配方為：1mol/L尿素，0.1mmol/l還原型谷胱甘肽，0.01mmol/l氧化型谷胱甘肽，30mmol/l三羥甲基氨基甲烷-鹽酸，pH8.5； e.選擇超濾膜截留分子量10KDa，將第一次復(fù)性所得物超濾濃縮，終體積為原體積的1/15，即為超濾所得物； f.將超濾所得物放置于2-8℃環(huán)境，至少96小時，即得第二次復(fù)性所得物； g.對第二次復(fù)性所得物進(jìn)行層析處理，得到重組人粒細(xì)胞集落刺激因子。 |
| 摘要 | 一種重組人粒細(xì)胞集落刺激因子的制備方法，包括步驟：a.選用工程菌DH5α-PBV220-hGCSF菌株進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)；b.對發(fā)酵培養(yǎng)所得菌體進(jìn)行包涵體的分離和洗滌，得到精制包涵體；c.對精制包涵體進(jìn)行變性處理，得到變性所得物；d.對變性所得物進(jìn)行第一次復(fù)性處理，得到第一次復(fù)性所得物；e.對第一次復(fù)性所得物進(jìn)行超濾處理，得到超濾所得物；f.對超濾所得物進(jìn)行進(jìn)行第二次復(fù)性處理，得到第二次復(fù)性所得物；g.對第二次復(fù)性所得物進(jìn)行層析處理，得到重組人粒細(xì)胞集落刺激因子，其純度達(dá)到98％以上、比活性不低于4.0×108IU/mg。本制備方法為解決人粒細(xì)胞集落刺激因子制備上存在的表達(dá)率偏低、菌體產(chǎn)量偏低、包涵體復(fù)性率偏低、活性偏低以及成本偏高等問題提供了可能。 |
| 國際公布 |
