| 公開(公告)號 | CN1303207C |
| 公開(公告)日 | 2007.03.07 |
| 申請(專利)號 | CN200410013849.9 |
| 申請日期 | 2004.01.08 |
| 專利名稱 | 組織型纖溶酶原激活劑突變體的復(fù)性分離純化方法 |
| 主分類號 | C12N9/00(2006.01)I |
| 分類號 | C12N9/00(2006.01)I;C07K1/14(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 中國藥科大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 沈子龍;廖建民;孫石靜;張新元 |
| 地址 | 210009江蘇省南京市童家巷24號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 南京知識律師事務(wù)所 |
| 代理人 | 胡錫瑜 |
| 國省代碼 | 江蘇;32 |
| 主權(quán)項 | 一種組織型纖溶酶原激活劑重組突變體瑞替普酶的復(fù)性方法，其特征是：首先收集表達(dá)瑞替普酶的基因工程菌菌體，收集包涵體，用組分為6～8M尿素、10～100mM Tris-HCl、0.5M NaCl、1～100mM咪唑、0～5mM 2-巰基乙醇、pH8的溶液I溶解、離心、取上清，獲得變性的瑞替普酶；然后變性的瑞替普酶通過用組分為6～8M尿素、10～100mM Tris-HCl、0.5M NaCl、1～100mM咪唑、0～5mM 2-巰基乙醇、pH8的溶液I預(yù)處理的Ni-Hi2+ Trap柱，上樣后，先用兩倍柱體積的組分為6～8M尿素、10～100mM Tris-HCl、0.5M NaCl、1～100mM咪唑、0～5mM 2-巰基乙醇、pH8的溶液I和組分為6～8M尿素、10～100mM Tris-HCl、0.5M NaCl、20～500mM咪唑、0～100mM 2-巰基乙醇、pH7～10的溶液II各洗滌一次，再以六倍柱體積的組分為10～100mM Tris-HCl、0.5M NaCl、1～100mM咪唑、0～100mM 2-巰基乙醇、pH7～10的溶液III洗滌；最后用兩到四倍柱體積的組分為10～100mM Tris-HCl、0.5M NaCl、50mM～1M咪唑、0～5mM 2-巰基乙醇、pH7～10的溶液IV洗脫有活性的瑞替普酶；或在洗滌完成后加入Xa因子，切割(His)6并用NaCl洗脫有活性的瑞替普酶。 |
| 摘要 | 本發(fā)明屬于醫(yī)藥生物技術(shù)重組蛋白分離純化技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種用低廉、普通級別的常用試劑咪唑和尿素，以它們的濃度梯度在合適的條件下，使在大腸桿菌中與(His)6融合表達(dá)的組織型纖溶酶原激活劑瑞替普酶正確折疊成有活性、并可在使瑞替普酶復(fù)性的同時分離純化得到純度達(dá)到96％的瑞替普酶的方法。該方法不但能簡化復(fù)性、分離純化的程序，還能提高復(fù)性率，最終提高瑞替普酶的產(chǎn)率，大大降低生產(chǎn)成本，并能應(yīng)用于工業(yè)化生產(chǎn)。 |
| 國際公布 |
