| 公開(公告)號 | CN1481900A |
| 公開(公告)日 | 2004.03.17 |
| 申請(專利)號 | CN03148880.3 |
| 申請日期 | 2003.06.16 |
| 專利名稱 | 抗感冒特異性IgY和復(fù)合IgY及其新型制劑 |
| 主分類號 | A61K39/395 |
| 分類號 | A61K39/395;A61P31/12 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 雅臣藥業(yè)集團(tuán)（遠(yuǎn)東)有限公司 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 包晟;胡義結(jié);楊榮 |
| 地址 | 510507廣東省廣州市天河區(qū)沙太路268號銀河大酒店837-839室 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 北京太兆天元知識產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 |
| 代理人 | 張韜 |
| 國省代碼 | 廣東;44 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種抗感冒特異性IgY，其特征在于抗感冒特異性IgY的制備方法包括下列步驟：A.培養(yǎng)所優(yōu)選的有代表性的各種致普通感冒的病原體：(1)有代表性的各種血清型鼻病毒培養(yǎng)方法：將人胚肺二倍體細(xì)胞接種于10％FCS DMEM培養(yǎng)液中，細(xì)胞終濃度1×105/ml；將15ml上述培養(yǎng)液置于100ml培養(yǎng)瓶中，將此培養(yǎng)瓶放置在37℃，5％CO2飽和培養(yǎng)箱中培養(yǎng)成單層細(xì)胞；然后棄掉培養(yǎng)液，將購自當(dāng)?shù)貒也《局行幕虿《狙芯繖C(jī)構(gòu)的血清型1A、2、5、14、23、29、31型的7種鼻病毒毒株分別用2％FCS和1％青鏈霉素DMEM培養(yǎng)液稀釋至100TCID50/ml；取此稀釋液10ml加入細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，并將此細(xì)胞培養(yǎng)瓶放置在37℃，5％CO2飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24-48小時(shí)后，待細(xì)胞病變達(dá)++++時(shí)分別收獲病毒，收獲病毒方法如下：將培養(yǎng)瓶凍融三次，收集培養(yǎng)上清，放入高速離心機(jī)中，以15000rpm轉(zhuǎn)速離心分離，收集上清；在加入甲醛至0.1％的終濃度，在37℃溫度下，經(jīng)過24小時(shí)分別滅活這7種培養(yǎng)的鼻病毒；培養(yǎng)好的滅活鼻病毒分別在4℃或-20℃保存；(2)有代表性的各種血清型冠狀病毒培養(yǎng)方法：將Vero E6細(xì)胞接種于10％FCS DMEM培養(yǎng)液中，細(xì)胞終濃度1×105/ml；將15ml上述培養(yǎng)液置于100ml培養(yǎng)瓶中，將此培養(yǎng)瓶放置在37℃，5％CO2飽和培養(yǎng)箱中培養(yǎng)成單層細(xì)胞；然后棄掉培養(yǎng)液，將購自當(dāng)?shù)貒也《局行幕虿《狙籽芯繖C(jī)構(gòu)的血清型229E、OC43型冠狀病毒毒株分別用2％FCS和1％青鏈霉素索DMEM培養(yǎng)液稀釋至100TCID 50/ml；取此稀釋10ml加入細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，并將此細(xì)胞培養(yǎng)瓶放置在37℃，5％CO2飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)后，待細(xì)胞病變達(dá)++++時(shí)分別收獲病毒；收獲病毒時(shí)將培養(yǎng)瓶凍融三次，收集培養(yǎng)上清，放入高速離心機(jī)中，以15000rpm轉(zhuǎn)速離心分離，收集上清；再加入甲醛至0.1％的終濃度，在37℃溫度下，經(jīng)過24小時(shí)分別滅活這2種培養(yǎng)的冠狀病毒；培養(yǎng)好的滅活冠狀病毒在4℃或-20℃保存；(3)有代表性的各種血清型腺病毒的培養(yǎng)方法：將人胚肺二倍體細(xì)胞接種于10％FCS DMEM培養(yǎng)液中，細(xì)胞終濃度1×105/ml；將15ml上述培養(yǎng)液置于100ml培養(yǎng)瓶中，將此培養(yǎng)瓶放置在37℃，5％CO2飽和培養(yǎng)箱終培養(yǎng)成單層細(xì)胞；然后棄掉培養(yǎng)液，將購自當(dāng)?shù)貒也《局行幕虿《狙芯克难逍?型、3型和4型冠狀病毒毒株分別用2％FCS和1％青鏈霉素DMEM培養(yǎng)液稀釋至100TCID 50/ml；取此稀釋液10ml加入細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，并將此細(xì)胞培養(yǎng)瓶放置在37℃，5％CO2飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24-48小時(shí)后，待細(xì)胞培養(yǎng)病變達(dá)++++時(shí)分別收獲病毒；收獲病毒時(shí)將培養(yǎng)瓶凍容三次，收集培養(yǎng)上清，放入高速離心機(jī)中，以15000rpm轉(zhuǎn)速離心分離，收集上清；再加入甲醛至0.1的終濃度，在37℃溫度下，經(jīng)過24小時(shí)分別滅活這3種培養(yǎng)的腺病毒；培養(yǎng)好的多種滅活腺病毒在4℃或-20℃保存；B.制備引致普通感冒的致病病毒的復(fù)合抗原：(1)將培養(yǎng)好的血清型1A型鼻病毒、2型鼻病毒、5型鼻病毒、14型鼻病毒、23型鼻病毒、29型鼻病毒、31型鼻病毒按1-10∶1-10∶1-10∶1-10∶1-10∶1-10∶1-10的比例混合制成鼻病毒混合物；(2)將培養(yǎng)好的血清型229E型冠狀病毒和OC43型冠狀病毒按1-10∶1-10的比例混合制成冠狀病毒混合物；(3)將培養(yǎng)好的血清型7型、3型和4型腺病毒按1-10∶1-10∶1-10的比例混合制成腺病毒混合物；(4)接著將分別制成的鼻病毒混合物和冠狀病毒混合物以及腺病毒混合物按1-10∶1-10∶1-10的比例混合，制成普通感冒病原體混合物；(5)將制成的普通感冒病原體混合物按1-10∶1-10的比例與福氏佐劑混勻，然后，加入高速勻漿機(jī)中以10000-30000rpm轉(zhuǎn)速進(jìn)行高速粉碎勻化，高速攪拌形成油包水乳液，即制成普通感冒(Common Cold)致病病毒的復(fù)合抗原；C.普通感冒繼發(fā)感染細(xì)菌復(fù)合抗原的制備：購買示售的肺炎雙球菌、A型溶血性鏈球菌、金黃色葡萄球菌、1型肺炎克雷伯桿菌、流感嗜血桿菌、綠膿桿菌等6種細(xì)菌菌株，用細(xì)菌培養(yǎng)基分別在細(xì)菌培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)；將培養(yǎng)好的細(xì)菌按以下比例混合勻化：肺炎雙球菌 50-30％A型溶血性鏈球菌 5-15％金黃色葡萄球菌 5-5％1型肺炎克雷伯桿菌 30-10％流感嗜血桿菌 5-15％綠膿桿菌 5-15％然后以1-10∶1-10比例加入福氏佐劑，再放進(jìn)高速勻漿機(jī)以10000-30000rpm轉(zhuǎn)速高速勻化，通過高速攪拌形成油包水溶液，制成含全菌和菌體成分的繼發(fā)感染細(xì)菌特殊復(fù)合抗原；D.制備致病病毒免疫蛋將采用上述方法制備的普通感冒致病病毒復(fù)合抗原，分別對產(chǎn)蛋母雞進(jìn)行免疫；每隔二周再強(qiáng)化注射一次，計(jì)免疫三次；第一次免疫20天后，檢取免疫后的母雞所產(chǎn)免疫蛋，并對應(yīng)不同的抗原，對所檢取的免疫蛋進(jìn)行編碼標(biāo)記；E.制備繼發(fā)感染細(xì)菌免疫蛋將采用上述方法制備的感冒繼發(fā)感染細(xì)菌復(fù)合抗原，分別對產(chǎn)蛋母雞進(jìn)行免疫；每隔二周再強(qiáng)化注射一次，計(jì)免疫三次；第一次免疫20天后，檢取免疫 |
| 摘要 | 本發(fā)明公開一種抗感冒復(fù)合IgY及其新型制劑。本發(fā)明技術(shù)方案如下：培養(yǎng)所優(yōu)選的有代表性的各種致普通感冒的病原體，優(yōu)選引致普通感冒繼發(fā)感染的主要致病細(xì)菌；制備普通感冒繼發(fā)感染細(xì)菌復(fù)合抗原和普通感冒抗原；制備致病病毒免疫蛋制備抗感冒致病病毒特異性IgY和抗繼發(fā)感染細(xì)菌特異性IgY粗提物；分別對特異性IgY粗提物進(jìn)行純化，即得純IgY。本發(fā)明的抗感冒病原體的特異性IgY和復(fù)合IgY可以在呼吸道和肺部構(gòu)建一種不易被病毒和致病菌感染的正常菌群生態(tài)，形成一道人體天然保護(hù)屏障，達(dá)到既治療又預(yù)防的雙重目的。 |
| 國際公布 |
