公開(公告)號(hào)
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CN1160462C
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公開(公告)日
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2004.08.04
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申請(qǐng)(專利)號(hào)
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CN96195892.8
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申請(qǐng)日期
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1996.06.06
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專利名稱
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利用革蘭氏陽(yáng)性菌表達(dá)重組蛋白質(zhì)
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主分類號(hào)
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C12N15/62
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分類號(hào)
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C12N15/62;C12N15/31;C12N15/74;C07K14/315
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分案原申請(qǐng)?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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1995.6.7 US 08/472,244
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申請(qǐng)(專利權(quán))人
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洛克菲勒大學(xué)
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發(fā)明(設(shè)計(jì))人
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A·達(dá)爾針?biāo)?S·懷特赫德;D·魯拜
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地址
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美國(guó)紐約州紐約
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頒證日
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2004.08.04
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國(guó)際申請(qǐng)
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PCT/US1996/009965 1996.6.6
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進(jìn)入國(guó)家日期
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1998.01.25
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專利代理機(jī)構(gòu)
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中國(guó)專利代理(香港)有限公司
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代理人
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盧新華;姜建成
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國(guó)省代碼
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美國(guó);US
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主權(quán)項(xiàng)
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一種在革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌中表達(dá)所需蛋白質(zhì)的方法,包括:選擇一種異源細(xì)菌宿主,此宿主是革蘭氏陽(yáng)性菌,其胞外蛋白酶的產(chǎn)生缺陷,并能通過(guò)C-末端分選信號(hào)錨定表面蛋白;將質(zhì)粒載體導(dǎo)入宿主,此載體包含編碼革蘭氏陽(yáng)性細(xì)胞壁表面蛋白氨基和羧基端分選序列和所需蛋白質(zhì)的DNA片段,以及在所選宿主中起作用的轉(zhuǎn)錄和翻譯控制序列;表達(dá)融合蛋白,此融合蛋白含所需蛋白、N-末端信號(hào)序列和C-末端分選序列,其中被表達(dá)的融合蛋白錨定于宿主細(xì)胞表面;使用蛋白酶從宿主細(xì)胞表面切割下被錨定的蛋白;和回收并純化切割下的蛋白。
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摘要
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一種用來(lái)在革蘭氏陽(yáng)性菌中克隆和表達(dá)基因的新系統(tǒng)。此表達(dá)系統(tǒng)是基于如下發(fā)現(xiàn):許多革蘭氏陽(yáng)性菌通過(guò)順式作用N一末端信號(hào)序列和C-末端錨定區(qū)將蛋白分選至其細(xì)胞表面。具體而言,鏈球菌M6蛋白,一種熟知的表面分子,其細(xì)胞分選信號(hào)被用于構(gòu)建革蘭氏陽(yáng)性表達(dá)系統(tǒng),稱之為SPEX(鏈球菌蛋白表達(dá))。通過(guò)將目的基因克隆入合適的SPEX盒,然后將此盒穩(wěn)定導(dǎo)入細(xì)菌宿主如人共生格氏鏈球菌而實(shí)現(xiàn)表達(dá)。根據(jù)所用的SPEX載體,重組蛋白在由特定的內(nèi)切蛋白酶切割釋放之前可被錨定于細(xì)胞壁上或在細(xì)菌生長(zhǎng)過(guò)程中被分泌入培養(yǎng)基中。使用缺失胞外蛋白酶的宿主細(xì)菌會(huì)保護(hù)分泌的蛋白不被蛋白酶降解。此系統(tǒng)中一些表達(dá)載體還生產(chǎn)被特異性標(biāo)記的重組蛋白,使所得產(chǎn)物可一步純化。
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國(guó)際公布
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WO1996/040943 英 1996.12.19
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