| 公開(公告)號 | CN1590559A |
| 公開(公告)日 | 2005.03.09 |
| 申請(專利)號 | CN03152881.3 |
| 申請日期 | 2003.09.01 |
| 專利名稱 | 一種單分子dsDNA微陣列芯片制備方法 |
| 主分類號 | C12Q1/68 |
| 分類號 | C12Q1/68 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權 | |
| 申請(專利權)人 | 王進科;李同祥;陸祖宏 |
| 發(fā)明(設計)人 | 王進科;李同祥;陸祖宏 |
| 地址 | 210096江蘇省南京市四牌樓2號東南大學吳健雄實驗室 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構 | |
| 代理人 | |
| 國省代碼 | 江蘇;32 |
| 主權項 | 一種制備單分子雙鏈脫氧核糖核酸(dsDNA)微陣列芯片的新方法，包括步驟：(1)、固相化學合成兩種單鏈寡核苷酸片段，一種為靶寡核苷酸，其5′端為兩段反向堿基互補序列，3′端為通用寡核苷酸互補序列；另一種為通用寡核苷酸，其3′端為羥基，5′端為化學修飾基團；(2)、在液相反應體系中將該通用寡核苷酸與靶寡核苷酸復性；(3)、兩寡核苷酸復性產物點樣固定到固相支持物表面，形成寡核苷酸微陣列；(4)、寡核苷酸微陣列在片核酸聚合酶延伸，形成雙分子dsDNA微陣列；(5)、雙分子dsDNA微陣列變性，形成單鏈脫氧核糖核酸(ssDNA)微陣列；(6)、ssDNA微陣列復性，單鏈3′端形成發(fā)卡結構；(7)、復性后ssDNA微陣列在片核酸聚合酶延伸，形成單分子dsDNA微陣列。 |
| 摘要 | 本發(fā)明提出一種新的在固相支持物表面制備單分子(unimolecular)雙鏈脫氧核糖核酸(double-stranded DNA，dsDNA)微陣列(microarray)的方法。該方法首先用固相化學合成兩條寡核苷酸，一條為靶寡核苷酸(target oligonucleotide)，另一條為通用寡核苷酸(universaloligonucleotide)；其中靶寡核苷酸從5′端到3′端含有如下構件：反向互補序列、蛋白質結合位點和通用寡核苷酸互補序列；通用寡核苷酸的5′端修飾特定化學基團，以便將DNA連接固定到固相支持物表面，3′端為羥基。芯片制備時，首先將靶寡核苷酸和通用寡核苷酸復性，將復性產物點印連接到固相支持物表面，制成寡核凸酸微陣列；對寡核苷酸微陣列進行在片(on-chip)DNA聚合酶延伸反應，使寡核苷酸微陣列成為雙分子(bimolecular)dsDNA微陣列；將微陣列變性處理，使其成為單鏈DNA(single-stranded DNA，ssDNA)微陣列；將ssDNA微陣列進行DNA復性處理，使單鏈DNA自由3′端形成發(fā)卡(hairpin)結構；最后對復性的ssDNA微陣列再進行在片DNA聚合酶延伸反應，使ssDNA微陣列成為單分子(unimolecular)dsDNA微陣列。本發(fā)明制備的單分子dsDNA微陣列芯片，在基礎分子生物學研究，特別是基因表達調控研究及生物醫(yī)學研究，如DNA結合蛋白相關疾病診斷、藥物作用機理和藥物性分子篩選研究中有廣泛的應用價值。 |
| 國際公布 |
