公開(公告)號
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CN1616096A
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公開(公告)日
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2005.05.18
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申請(專利)號
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CN200410040721.1
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申請日期
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2004.09.16
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專利名稱
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減毒株脊髓灰質(zhì)炎滅活疫苗培養(yǎng)方法
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主分類號
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A61K39/13
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分類號
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A61K39/13;A61P31/14;C12N7/00
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分案原申請?zhí)? |
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優(yōu)先權
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申請(專利權)人
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中國醫(yī)學科學院醫(yī)學生物學研究所
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發(fā)明(設計)人
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褚嘉祐;姜述德;廖國陽;孫明波;李衛(wèi)東;張麗旌;謝忠平;俞泳霆
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地址
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650118云南省昆明市茭菱路379號
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頒證日
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國際申請
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進入國家日期
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專利代理機構
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昆明正原專利代理有限責任公司
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代理人
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徐玲菊
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國省代碼
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云南;53
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主權項
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一種減毒株脊髓灰質(zhì)炎滅活疫苗培養(yǎng)方法,其特征在于它經(jīng)過下列工藝步驟:1)、三級放大細胞培養(yǎng):a、首先對細胞種子進行離心清洗,按最低需求培養(yǎng)液(MEM)∶Vero細胞種子=500-1000∶1的比例,接種到5-10升小容量發(fā)酵罐中進行細胞培養(yǎng),控制培養(yǎng)溫度35-37℃.pH7.0-7.4,溶解氧30-50%,并于培養(yǎng)第三天開始灌流,灌流量按細胞生長情況由1升/天最終增加到5升/天,培養(yǎng)5-7天,使細胞增殖至1-3×106個細胞/毫升,進行胰酶消化;b、將a步驟胰酶消化過的細胞懸液,按最低需求培養(yǎng)液(MEM)∶Vero細胞種子=500-1000∶1的比例,接種于50-85升中容量發(fā)酵罐中培養(yǎng),控制培養(yǎng)溫度35-37℃,pH7.0-7.4,溶解氧30-50%,在再循環(huán)培養(yǎng)液體積為50-100升條件下,于第三天開始進行再循環(huán)培養(yǎng),培養(yǎng)5-7天,使細胞密度達1-3×106個細胞/毫升,進行胰酶消化;c、將b步驟胰酶消化過的細胞懸液,按最低需求培養(yǎng)液(MEM)∶Vero細胞種子=500-1000∶1的比例,接種于300-550升大容量發(fā)酵罐中培養(yǎng),控制培養(yǎng)溫度35-37℃,pH7.0-7.4,溶解氧30-50%,培養(yǎng)5-7天,使細胞密度為1-3×106個細胞/毫升;2)、病毒培養(yǎng):收獲c步驟的細胞培養(yǎng)液,用M199洗細胞一次,加入M199培養(yǎng)液,按病毒∶細胞=0.01-0.1∶1的比例,接種脊髓灰質(zhì)炎減毒株病毒,進行病毒培養(yǎng),控制培養(yǎng)溫度32-34℃,pH7.0-7.4,溶解氧20-30%,培養(yǎng)48-96小時,收獲病毒液。
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摘要
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本發(fā)明提供一種減毒株脊髓灰質(zhì)炎滅活疫苗培養(yǎng)方法,采用Vero細胞、脊髓灰質(zhì)炎減毒株病毒,在發(fā)酵罐中進行培養(yǎng),通過細胞培養(yǎng)規(guī)模的三級放大,使細胞培養(yǎng)面積相當于21000個1升玻璃瓶靜置培養(yǎng)的面積,且細胞產(chǎn)量是常規(guī)1升瓶靜置培養(yǎng)的21000倍,常規(guī)10升轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)的2100倍,既減少了培養(yǎng)空間,又降低了培養(yǎng)液用量,同時也減少了勞動力投入,短時間內(nèi)即可實現(xiàn)大規(guī)模制備細胞及病毒液,滿足脊髓灰質(zhì)炎滅活疫苗對大量病毒抗原的需求。另用本發(fā)明生產(chǎn)的病毒液制備成疫苗后,質(zhì)量穩(wěn)定可靠,安全性及免疫原性良好,經(jīng)檢定全部符合國家生物制品規(guī)程的要求。
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國際公布
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