用人胚肺二倍體細胞培養(yǎng)繁殖脊髓灰質炎病毒的方法
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公開(公告)號
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CN1637140A
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公開(公告)日
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2005.07.13
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申請(專利)號
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CN200410079584.2
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申請日期
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2004.11.26
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專利名稱
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用人胚肺二倍體細胞培養(yǎng)繁殖脊髓灰質炎病毒的方法
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主分類號
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C12N7/04
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分類號
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C12N7/04
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分案原申請?zhí)? |
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優(yōu)先權
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申請(專利權)人
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中國醫(yī)學科學院醫(yī)學生物學研究所
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發(fā)明(設計)人
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胡云章;胡凝珠;劉國棟;瞿素;王榮福
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地址
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650118云南省昆明市茭菱路379號
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頒證日
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國際申請
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進入國家日期
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專利代理機構
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昆明正原專利代理有限責任公司
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代理人
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徐玲菊
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國省代碼
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云南;53
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主權項
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一種用人胚肺二倍體細胞KMB17培養(yǎng)脊髓灰質炎病毒的方法，包括細胞培養(yǎng)、懸浮吸附培養(yǎng)，病毒培養(yǎng)，其特征在于經過下列具體工藝步驟：A、取人胚肺二倍體成纖維細胞KMB17或者人二倍體成纖維細胞2BS的第10～40代，用0.03～0.05％胰蛋白酶+0.02～0.04％乙二胺四乙酸EDTA將單層細胞分散并懸浮于培養(yǎng)液中，接種于容器中，35～37℃靜置培養(yǎng)至長成致密單層；B、將長成致密單層的KMB17細胞或者2BS細胞棄營養(yǎng)液，消化后，用含2～5％血清的培養(yǎng)基MEM將細胞收集于另一容器內，記數，按0.03～0.05MOI的量加入脊髓灰質炎病毒毒種，在33±0.5℃下，放入轉速為20-120轉/分鐘的攪拌器上攪拌，進行懸浮吸附0.5～2.0小時；C、將懸浮吸附好的懸液分裝于培養(yǎng)瓶內，補加含5％～10％血清濃度的營養(yǎng)液至每個培養(yǎng)瓶并使終體積為100～200ml，于33±0.5℃靜置培養(yǎng)20～24小時，換成無血清培養(yǎng)液，培養(yǎng)至90h，細胞出現病變時，即收獲細胞并于-20～-30℃凍存，24小時以后化凍，合并樣品、檢測感染性滴度后，即得生產疫苗用的脊髓灰質炎病毒液。
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摘要
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本發(fā)明提供一種用人胚肺二倍體細胞KMB17培養(yǎng)脊髓灰質炎病毒的方法，其特征在于取人胚肺二倍體成纖維細胞KMB17或者人二倍體成纖維細胞2BS的第10～40代，并將單層細胞分散并懸浮于培養(yǎng)液中，靜置培養(yǎng)至長成致密單層，用含血清的培養(yǎng)基將細胞收集，加入脊髓灰質炎病毒毒種進行懸浮吸附，補加含血清的營養(yǎng)液，靜置培養(yǎng)，換成無血清培養(yǎng)液，細胞出現病變時，收獲細胞，經凍存、化凍、合并、檢測感染性滴度后，得生產疫苗用的脊髓灰質炎病毒液。本發(fā)明可使病毒與細胞受體充分接觸，有利于病毒進入細胞，同時使細胞處于分裂狀態(tài)，有利于病毒繁殖，不僅提高了產量，而且顯著提高了脊髓灰質炎病毒的滴度，與傳統(tǒng)的猴腎原代細胞培養(yǎng)的病毒滴度相比無顯著差異(P＞0.05)。
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國際公布
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