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公開(公告)號(hào)
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CN1238381C
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公開(公告)日
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2006.01.25
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申請(qǐng)(專利)號(hào)
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CN200310106256.2
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申請(qǐng)日期
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2003.11.08
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專利名稱
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抗腫瘤表面抗原p185單抗嵌合抗體及其制備方法
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主分類號(hào)
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C07K16/18(2006.01)I
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分類號(hào)
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C07K16/18(2006.01)I;C07K19/00(2006.01)I;C12P21/00(2006.01)I
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分案原申請(qǐng)?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(qǐng)(專利權(quán))人
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中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)
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發(fā)明(設(shè)計(jì))人
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劉 兢;程聯(lián)勝
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地址
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230026安徽省合肥市金寨路96號(hào)
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頒證日
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國(guó)際申請(qǐng)
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進(jìn)入國(guó)家日期
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專利代理機(jī)構(gòu)
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合肥華信專利商標(biāo)事務(wù)所
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代理人
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余成俊
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國(guó)省代碼
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安徽;34
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主權(quán)項(xiàng)
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一種抗腫瘤表面抗原p185單鏈抗體-人scFv-Fc嵌合抗體，分子中包括兩個(gè)由單鏈抗體組成的兩個(gè)抗原結(jié)合區(qū)和兩條人抗體IgG1分子恒定區(qū)通過三對(duì)二硫鍵連接在一起的Fc片段；其特征在于：1)該嵌合抗體分子僅由兩條相同的重組單鏈組成，每條重組單鏈有一個(gè)抗原結(jié)合區(qū)，它是由重鏈和輕鏈可變區(qū)共價(jià)連接在一起，構(gòu)成識(shí)別抗原的單鏈抗體，命名為A21scFv；2)該單鏈抗體A21scFv的氨基酸序列為：VLDIVLTQTPSSLPVSVGEKVTMTCKSSQTLLYSNNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLISWAFTRKSGVPDRFTGSGSGTDFTLTIGSVKAEDLAVYYCQQYSNYLinkerPWTFGGGTKLEIKRGGGGSGVHGGGSGGGGSGGGGSEVQLQQSGPEVVKTGASVKISCKASGYSFTGYFINWVKKNSGKSPEWIGHISSSYATSTYNQKFKNKAAFTVDTSSSTAFMQLNSLTSEDSAVYYCVRSGNYEEYAMDYWGQGTSVTVSS其中的黑體部分為重鏈和輕鏈的抗原結(jié)合區(qū)，下劃線部分為重鏈和輕鏈可變區(qū)之間的連接區(qū)；每條單鏈scFv片段與人抗體IgG1的Fc片段之間是通過肽鍵共價(jià)連接構(gòu)成了一條scFv-Fc嵌合單鏈，嵌合單鏈中scFv與Fc的連接區(qū)有一段稱作絞鏈區(qū)的肽段部分含有三對(duì)共價(jià)的鏈間二硫鍵；即這個(gè)分子是由兩條嵌合單鏈通過三對(duì)鏈間二硫鍵連接組成的同二聚體的嵌合抗體分子。
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摘要
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本發(fā)明針對(duì)腫瘤表面抗原p185的單鏈抗體-人scFv-Fc嵌合抗體及其制備方法，特征是采用表面表位包埋法免疫后制備的雜交瘤細(xì)胞株，以單鏈嵌合抗體基因的形式轉(zhuǎn)染哺乳動(dòng)物細(xì)胞CHO，采用pEE14作為重組抗體的載體，用它攜帶基因轉(zhuǎn)染到GS低表達(dá)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞CHO中，將高表達(dá)重組抗體的CHO細(xì)胞株篩選出來；本發(fā)明的嵌合抗體分子僅由兩條相同的重組單鏈組成，每條重組單鏈有一的抗原結(jié)合區(qū)，由重鏈和輕鏈可變區(qū)共價(jià)連接在一起，構(gòu)成了識(shí)別抗原的單鏈抗體；由于去除了輕鏈恒定區(qū)和重鏈恒定區(qū)的CH1結(jié)構(gòu)域，比完整抗體的分子量小了近三分之一，既更容易透過血管系屏障滲透進(jìn)實(shí)體瘤的內(nèi)部，又不像小的蛋白多肽藥物那樣容易很快被降解，從而能更好地發(fā)揮抑制腫瘤生長(zhǎng)的作用。
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國(guó)際公布
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