公開(公告)號
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CN1740192A
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公開(公告)日
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2006.03.01
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申請(專利)號
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CN200510060668.6
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申請日期
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2005.09.08
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專利名稱
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眼鏡蛇毒神經(jīng)毒素和細(xì)胞毒素的分離純化方法
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主分類號
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C07K14/435(2006.01)I
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分類號
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C07K14/435(2006.01)I;C07K1/14(2006.01)I
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分案原申請?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(專利權(quán))人
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浙江大學(xué)
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發(fā)明(設(shè)計(jì))人
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童富淡;張海花;金蘇華
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地址
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310029浙江省杭州市江干區(qū)凱旋路258號浙江大學(xué)華家池校區(qū)動物科學(xué)學(xué)院
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頒證日
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國際申請
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進(jìn)入國家日期
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專利代理機(jī)構(gòu)
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杭州中成專利事務(wù)所有限公司
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代理人
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馮子玲
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國省代碼
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浙江;33
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主權(quán)項(xiàng)
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眼鏡蛇毒神經(jīng)毒素和細(xì)胞毒素的分離純化方法,其特征在于以下步驟:(1)按重量份1份眼鏡蛇毒原液使用10份丙酮研磨、洗滌,操作時(shí),先取適量丙酮研磨眼鏡蛇毒原液成勻漿,以濾紙過濾勻漿,再用剩余丙酮洗滌,室溫放置使丙酮揮發(fā),即得眼鏡蛇毒丙酮粉;(2)眼鏡蛇毒丙酮粉按1∶10(W/V)溶解于蒸餾水中,用50%的乙酸溶液調(diào)節(jié)pH至4.0~5.0,10000rpm4℃低溫離心5~10min,取上清液;(3)按上清液體積計(jì),加入25%的聚丙烯酸(polyacrylicacid,PAA)至終濃度為3~5%(W/V),記錄PAA加入量,4℃放置30~50min,2000rpm4℃低溫離心3~5min,取沉淀溶解于適量蒸餾水中,用0.5mol/L碳酸鈉溶液調(diào)pH至9.5~10.0,加氯化鈉至終濃度為4~5%(W/V),以已加入的PAA∶氯化鈣溶液為1∶35(W/V)加入20%的氯化鈣溶液并混勻,室溫放置30min,以鹽酸調(diào)節(jié)pH至4.0~5.0,室溫放置30~50min,10000rpm4℃低溫離心5~10min,取上清液;(4)上清液用超細(xì)顆粒SephadexG-50凝膠柱分離,以5~10mmol/LpH7.0~7.5含0.2~0.3mol/L氯化鈉的磷酸鹽緩沖液洗脫,第一個(gè)洗脫主峰為神經(jīng)毒素,第二個(gè)洗脫主峰為細(xì)胞毒素,收集各級分溶液凍干,即分別為眼鏡蛇毒神經(jīng)毒素和細(xì)胞毒素。
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摘要
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本發(fā)明公開了一種眼鏡蛇蛇毒神經(jīng)毒素和細(xì)胞毒素的分離純化方法,可同時(shí)分離眼鏡蛇毒神經(jīng)毒素和細(xì)胞毒素,提高了眼鏡蛇毒的綜合利用效率。本發(fā)明先使用丙酮處理眼鏡蛇蛇毒原液,以除去蛇毒原液中的脂溶性成分,以酸調(diào)節(jié)蛇毒丙酮粉水溶液的pH,離心除去蛇毒中的中酸性蛋白和多肽,再以PAA特異吸附并沉淀蛇毒中的堿性蛋白和堿性多肽,離心分離PAA-堿性蛋白/多肽復(fù)合物,除去水溶性成分;利用pH變化使PAA-堿性蛋白/多肽解吸附,用氯化鈣除去PAA;以Sephadex G-50(超細(xì)顆粒)凝膠柱分離純化眼鏡蛇毒神經(jīng)毒素和細(xì)胞毒素,產(chǎn)品含鹽量低,可直接冷凍干燥。
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國際公布
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