| 公開(公告)號 | CN1237175C |
| 公開(公告)日 | 2006.01.18 |
| 申請(專利)號 | CN98812925.6 |
| 申請日期 | 1998.11.10 |
| 專利名稱 | 在轉(zhuǎn)基因苜蓿植株中的蛋白生產(chǎn) |
| 主分類號 | C12N15/82(2006.01)I |
| 分類號 | C12N15/82(2006.01)I;C07K14/075(2006.01)I;C07K16/18(2006.01)I;C12Q1/02(2006.01)I;A01H1/04(2006.01)I;A01H5/00(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | 1997.11.10 CA 2220563 |
| 申請(專利權(quán))人 | 加拿大農(nóng)業(yè)及農(nóng)業(yè)食品部;赫馬-魁北克公司;拉瓦爾大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | L·-P·維茲納;S·拉伯格;R·巴津;H·克豪迪;R·萊米烏克斯;G·阿拉德 |
| 地址 | 加拿大魁北克省 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | 1998-11-10 PCT/CA1998/001055 |
| 進入國家日期 | 2000.07.04 |
| 專利代理機構(gòu) | 中國專利代理(香港)有限公司 |
| 代理人 | 譚明勝 |
| 國省代碼 | 加拿大;CA |
| 主權(quán)項 | 可提取蛋白的穩(wěn)定生產(chǎn)方法，其包括：a)提供一種被轉(zhuǎn)化的苜蓿植株，其包含一種載體，所述載體包含編碼所述蛋白的基因，其中所述植株的基因型：i)是多年生的；ii)顯示胚胎發(fā)生潛力；iii)是可轉(zhuǎn)化的；并且iv)在至少3小時期間內(nèi)在提取物中表現(xiàn)出可忽略的蛋白水解活性；b)培育所述被轉(zhuǎn)化的苜蓿植株，使所述基因表達以產(chǎn)生所述蛋白；c)收獲所述被轉(zhuǎn)化的苜蓿植株或被轉(zhuǎn)化的苜蓿植株的子代的地上部分，所述子代是由所述被轉(zhuǎn)化的苜蓿植株的繁殖體產(chǎn)生的；d)從步驟c)中收獲的地上部分的組織中提取所述蛋白；e)使所述被轉(zhuǎn)化的苜蓿植株或被轉(zhuǎn)化的子代苜蓿植株再生長地上部分；并且f)重復(fù)步驟c)至e)以連續(xù)地、穩(wěn)定地提供所述蛋白。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及特征鑒定適用于生產(chǎn)功能性轉(zhuǎn)基因蛋白的宿主系統(tǒng)，所述功能性轉(zhuǎn)基因蛋白用于需要政府管理批準的應(yīng)用，諸如抗人IgG。眾所周知，管理機構(gòu)要求用于生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因蛋白的主細胞庫和主細胞系是穩(wěn)定和持久的，以確保足夠的材料用于合適的特征鑒定、臨床試驗和潛在的銷售。目前的植物生產(chǎn)系統(tǒng)需要建立用于此目的的種子庫。然而，有許多缺點與用于生產(chǎn)持續(xù)可靠的轉(zhuǎn)基因蛋白源的這種系統(tǒng)相關(guān)。本發(fā)明的一方面涉及特征鑒定適用于符合嚴格管理要求的轉(zhuǎn)基因蛋白的植物生產(chǎn)系統(tǒng)。本發(fā)明的另一方面例舉了通過在轉(zhuǎn)基因苜蓿植株中表達相應(yīng)的基因，生產(chǎn)和特征鑒定用作血清試劑的抗人IgG。將人IgG特異性IgG2a(κ)鼠mAb(C5-1)的重鏈和輕鏈的cDNA通過農(nóng)桿菌感染轉(zhuǎn)移入苜蓿中。獲得了表達編碼輕鏈和重鏈的mRNA的轉(zhuǎn)基因植株，發(fā)現(xiàn)來自F1子代(通過有性雜交獲得的)的植株表達完全裝配的C5-1。此外，所述轉(zhuǎn)基因蛋白在體內(nèi)以及在提取和純化步驟期間是穩(wěn)定的。純化產(chǎn)生獨特的H2L2形式，在標準化血清學(xué)試驗中其反應(yīng)性不可與雜交瘤衍生C5-1的反應(yīng)性區(qū)分。結(jié)果表明，植物衍生的轉(zhuǎn)基因蛋白諸如mAb可以與雜交瘤衍生的mAb一樣有效地用作診斷試劑，并且證明轉(zhuǎn)化的苜蓿系統(tǒng)生產(chǎn)大量蛋白(包括諸如mAb的多體蛋白)的有用性。 |
| 國際公布 | 1999-05-20 WO1999/024592 英 |
