| 公開(公告)號(hào) | CN100340667C |
| 公開(公告)日 | 2007.10.03 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN200410051403.5 |
| 申請(qǐng)日期 | 2004.09.09 |
| 專利名稱 | 用于RNA干擾研究的表達(dá)載體 |
| 主分類號(hào) | C12N15/79(2006.01)I |
| 分類號(hào) | C12N15/79(2006.01)I;C12N15/861(2006.01)I |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 廣東省人民醫(yī)院 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 單志新;余細(xì)勇;林秋雄 |
| 地址 | 510080廣東省廣州市中山二路106號(hào) |
| 頒證日 | |
| 國際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 廣州粵高專利代理有限公司 |
| 代理人 | 陳 衛(wèi) |
| 國省代碼 | 廣東;44 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種用于表達(dá)siRNA的重組腺病毒質(zhì)粒載體的構(gòu)建方法，其特征在于包括如下步驟：(1)將小鼠U6RNA聚合酶III啟動(dòng)子序列取代真核表達(dá)載體的啟動(dòng)子序列，構(gòu)建PolIII重組真核表達(dá)載體；(2)根據(jù)目標(biāo)siRNA序列，制備其對(duì)應(yīng)DNA模板序列；(3)將DNA模板序列定向插入PolIII重組真核表達(dá)載體的BamHI和XhoI或NotI或EcoRV位點(diǎn)間，構(gòu)建siRNA表達(dá)載體；(4)將小鼠U6RNA聚合酶III啟動(dòng)子序列，取代腺病毒穿梭質(zhì)粒載體的啟動(dòng)子序列，構(gòu)建成重組腺病毒穿梭質(zhì)粒載體；(5)根據(jù)PolIII重組真核表達(dá)載體和重組腺病毒穿梭質(zhì)粒載體的PolIII啟動(dòng)子上下游單一的SpeI和XhoI或NotI或EcoRV識(shí)別位點(diǎn)，將步驟(3)所構(gòu)建的siRNA表達(dá)載體中包含目標(biāo)siRNA的DNA模板序列片段亞克隆到重組腺病毒穿梭質(zhì)粒載體中，構(gòu)建重組腺病毒質(zhì)粒載體。 |
| 摘要 | 本發(fā)明公開了用于RNA干擾研究的表達(dá)載體。本發(fā)明對(duì)真核表達(dá)載體和腺病毒穿梭質(zhì)粒載體進(jìn)行了啟動(dòng)子的序列改造。經(jīng)過啟動(dòng)子改造的真核表達(dá)載體上有polIII啟動(dòng)子，可以在真核細(xì)胞中表達(dá)siRNA；經(jīng)過啟動(dòng)子改造的腺病毒穿梭質(zhì)粒載體上有一致的polIII啟動(dòng)子及兩側(cè)序列，可將構(gòu)建于經(jīng)過啟動(dòng)子改造的真核表達(dá)載體上的目的序列亞克隆到經(jīng)過啟動(dòng)子改造的腺病毒穿梭質(zhì)粒載體上，進(jìn)而制備可表達(dá)siRNA的重組腺病毒質(zhì)粒載體，在細(xì)胞及整體動(dòng)物水平上進(jìn)行RNA干擾的實(shí)驗(yàn)研究，可以大大縮短實(shí)驗(yàn)周期，提高研究效率。 |
| 國際公布 |
