| 公開(公告)號 | CN1264977C |
| 公開(公告)日 | 2006.07.19 |
| 申請(專利)號 | CN02117823.2 |
| 申請日期 | 2002.05.22 |
| 專利名稱 | 一種蚯蚓DNA酶及其提取方法 |
| 主分類號 | C12N9/22(2006.01)I |
| 分類號 | C12N9/22(2006.01)I;C07K1/18(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權 | |
| 申請(專利權)人 | 上海克侖生物工程有限公司 |
| 發(fā)明(設計)人 | 牛 勃;楊利軍;楊 琦;向 前;閆占清;胡曉年;劉曉玲;楊 濤;常冰梅 |
| 地址 | 201203上海浦東張江高科碧波路328號B座110室 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構 | 北京華科聯(lián)合專利事務所 |
| 代理人 | 楊 厚;王 為 |
| 國省代碼 | 上海;31 |
| 主權項 | 一種蚯蚓DNA酶及其提取方法，其特征包括蚯蚓除毒、細胞破碎、鹽析、脫鹽、凝膠過濾、層析步驟，具體步驟如下： A、蚯蚓除毒，是先將蚯蚓洗盡，浸泡兩日，至其體內泥土完全排出，身體呈潔凈半透明狀，再用20v電脈沖刺激排除蚯蚓體內多種有害微生物及其毒素，及時更換鹽溶液浸泡3至4次，直至無肉眼可見黃色毒液分泌為止； B、細胞破碎，是將上述無毒蚯蚓用超聲細胞破碎器進行勻漿，再用高速冷凍離心機離心，將過夜抽提液在pH5.4環(huán)境下，4℃，12000轉離心20分鐘，可見試管中淡黃色澄清透明的上清液和管底褐色混濁的沉淀物； C、鹽析，是采用硫酸氨分段進行：鹽析溫度4℃、pH5.4、時間18小時；棄40％飽和度時的沉淀和70％飽和度時的上清液，收集70％飽和度時沉淀蛋白，即有DNA酶活性部分； D、脫鹽、凝膠過濾，層析，其中層析采用DEAE陰離子交換層析，洗脫條件是：20mMTris鹽酸，pH8.0，0-0.1MNacl，24ml/小時洗脫速度；收集0-0.1M/LNacl范圍的活性峰洗脫液，即可得到一種層析純或電泳純DNA酶，分子量為45000±300道爾頓的蛋白。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及一種高效穩(wěn)定的蚯蚓DNA酶及其提取方法，此酶可將環(huán)狀的質粒DNA、鏈狀的嗜菌體DNA、鮭精DNA、小牛血清DNA降解成小核苷酸片段，化學性質穩(wěn)定，最適溫度在41℃左右，耐高溫，90℃三小時活性無明顯改變，最適pH值為5.4左右，Mn，Mg，Ba等大部分重金屬離子對其有較強的激活作用，提取該酶的方法包括蚯蚓除毒、細胞破碎、鹽析、脫鹽、層析、凝膠過濾等六步驟，此酶生產工藝簡單，產量高，成本低，化學性質穩(wěn)定，易保存運輸，該提取方法提取DNA酶量大，純度高，實驗設備要求簡單，具有廣泛的應用前景。 |
| 國際公布 |
