| 公開(公告)號 | CN1810957A |
| 公開(公告)日 | 2006.08.02 |
| 申請(專利)號 | CN200510041961.8 |
| 申請日期 | 2005.04.19 |
| 專利名稱 | 一種永生化人骨髓基質(zhì)干細胞系及其建立方法 |
| 主分類號 | C12N5/08(2006.01)I |
| 分類號 | C12N5/08(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 胡蘊玉;滕 勇;白建萍;呂 榮;李 丹 |
| 地址 | 710032陜西省西安市長樂西路17號第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院骨科研究所 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構(gòu) | 西安慈源有限責(zé)任專利事務(wù)所 |
| 代理人 | 鮑燕平 |
| 國省代碼 | 陜西;61 |
| 主權(quán)項 | 一種永生化人骨髓基質(zhì)干細胞系及其建立方法，原代人骨髓基質(zhì)干細胞來源于正常流產(chǎn)胎兒骨髓組織，其特征在于，該永生化人骨髓基質(zhì)干細胞系體外培養(yǎng)能無限克隆增殖、且具有多向分化潛能；具體包括： 1)形態(tài)特征H.E染色，永生化人骨髓基質(zhì)干細胞完全貼壁后呈纖維樣或多角型，核多為圓形，細胞核質(zhì)比大，線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等細胞器發(fā)達，屬生長旺盛的成纖維樣細胞； 2)生長特性細胞數(shù)較少時，可見典型的單克隆生長方式；當(dāng)細胞生長至75％融合時，呈纖維樣，生長曲線表明，細胞接種1～2天生長緩慢，3～5天進入對數(shù)生長期，細胞倍增時間為40.08小時，從細胞生長曲線及1年以上擴增細胞生長情況看，該細胞系為永生化人骨髓基質(zhì)干細胞系； 3)流式細胞分析特征永生化人骨髓基質(zhì)干細胞表達CD29，CD44，CD106，不表達CD34，CD45，CD14，HLA-DR分子，從細胞表面分子標(biāo)志證實本研究獲得的永生化人骨髓基質(zhì)干細胞系并非造血系細胞； 4)染色體核型分析傳至112代的人骨髓基質(zhì)干細胞染色體數(shù)目為2n＝46，其中，中部著絲粒染色體有5對，臂比值為1.33±0.02～1.07±0.03；亞中部著絲粒染色體有7對，臂比值為3.18±0.03～1.45±0.07；端部著絲粒染色體有6對，小染色體有4對，性染色體1對，染色體核型正常； 5)生物學(xué)特征體外連續(xù)培養(yǎng)過程中，永生化人骨髓基質(zhì)干細胞具有克隆形成能力，無裸鼠致瘤性，在軟瓊脂內(nèi)不能生長，血清依賴性無顯著降低，仍具有接觸抑制性，不具備轉(zhuǎn)化細胞或癌細胞的特征，是正常細胞； 6)成體干細胞特征永生化人骨髓基質(zhì)干細胞可以定向誘導(dǎo)分化為成骨、軟骨以及心肌樣細胞，具備成體干細胞的特性。 |
| 摘要 | 本發(fā)明屬于一種永生化人骨髓基質(zhì)干細胞系及其建立方法，原代人骨髓基質(zhì)干細胞來源于正常流產(chǎn)胎兒骨髓組織，有限稀釋法進行單細胞克隆培養(yǎng)純化原代細胞，通過轉(zhuǎn)染pCIneo-hTERT基因獲得永生化。該人骨髓基質(zhì)干細胞系體外培養(yǎng)能無限克隆增殖，但不具備轉(zhuǎn)化細胞或癌細胞的特征，在細胞生物學(xué)特征上是正常細胞；細胞可以定向誘導(dǎo)分化為成骨、軟骨以及心肌樣細胞，具有多向分化潛能，仍具備成體干細胞的特性�？梢栽谏锕こ填I(lǐng)域得到應(yīng)用。這種永生化人骨髓基質(zhì)干細胞系及其建立方法，為研究人骨髓基質(zhì)干細胞的生物學(xué)行為提供標(biāo)準細胞系，為組織工程基礎(chǔ)研究提供平臺，為臨床應(yīng)用提供足量種子細胞，并為建立人骨髓基質(zhì)干細胞系提供一種有效、可靠的方法。 |
| 國際公布 |
