| 公開(公告)號 | CN1280417C |
| 公開(公告)日 | 2006.10.18 |
| 申請(專利)號 | CN200410088717.2 |
| 申請日期 | 2004.11.01 |
| 專利名稱 | 一種人酪氨酸酶表達載體及其應(yīng)用 |
| 主分類號 | C12N15/63(2006.01)I |
| 分類號 | C12N15/63(2006.01)I;C12R1/84(2006.01)I;C12N15/81(2006.01)I;C12N9/00(2006.01)I;C12N15/52(2006.01)I;C12N1/19(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 清華大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 陳國強;王宏濤;李振國;吳 瓊 |
| 地址 | 100084北京市海淀區(qū)清華園 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構(gòu) | 北京紀(jì)凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 |
| 代理人 | 關(guān) 暢 |
| 國省代碼 | 北京;11 |
| 主權(quán)項 | 一種人酪氨酸酶表達載體，是轉(zhuǎn)化了人酪氨酸酶基因和具有序列表中序列1核苷酸序列的His-tag基因的巴斯德畢赤酵母表達載體；所述巴斯德畢赤酵母表達載體為pPIC3.5K、pPIC3、pPIC9、pHIL-D1、pA0804、pA0815、pPSC3K或pPIC9K。 |
| 摘要 | 本發(fā)明公開了一種人酪氨酸酶表達載體及其應(yīng)用，其目的是提供一種人酪氨酸酶表達載體及導(dǎo)入該載體的重組巴斯德畢赤酵母細胞和利用該重組細胞生產(chǎn)人酪氨酸酶的方法。該人酪氨酸酶表達載體是含有人酪氨酸酶基因和His-tag基因的巴斯德畢赤酵母表達載體。表達人酪氨酸酶的方法，包括培養(yǎng)重組巴斯德畢赤酵母細胞，甲醇誘導(dǎo)表達人酪氨酸酶及利用金屬親和層析分離純化人酪氨酸酶的步驟。本發(fā)明的人酪氨酸酶基因表達載體通過同源重組使人酪氨酸酶基因整合入巴斯德畢赤酵母細胞的基因組中，穩(wěn)定表達人酪氨酸酶，而且在發(fā)酵過程中無需使用昂貴的抗生素和IPTG，使生產(chǎn)成本大大降低，此外，巴斯德畢赤酵母的高密度生長，也有利于人酪氨酸酶的表達，表達量可達0.39g/L。 |
| 國際公布 |
