| 公開(公告)號 | CN1314811C |
| 公開(公告)日 | 2007.05.09 |
| 申請(專利)號 | CN200510042988.9 |
| 申請日期 | 2005.07.25 |
| 專利名稱 | 重組嵌合分子Cb1-Grb7(SH2)-RING真核表達質粒及抗腫瘤基因藥物用途 |
| 主分類號 | C12N15/79(2006.01)I |
| 分類號 | C12N15/79(2006.01)I;C12N15/66(2006.01)I;A61K48/00(2006.01)I;A61P35/00(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權 | |
| 申請(專利權)人 | 中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學 |
| 發(fā)明(設計)人 | 李 霞;張 璟;劉新平;藥立波 |
| 地址 | 710032陜西省西安市長樂西路17號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構 | 西安通大專利代理有限責任公司 |
| 代理人 | 李鄭建 |
| 國省代碼 | 陜西;61 |
| 主權項 | 重組嵌合分子Cbl-Grb7(SH2)-RING真核表達質粒的構建方法，其特征在于： 首先將BamH I和EcoR V引入Cbl N端編碼基因SH2的兩端，獲得CblN(BamH I+EcoRV)；將其克隆入pGEM-T easy載體進行測序，測序正確后利用KpnI/XhoI酶切，將酶切片段插入到pcDNA3.1(+)真核表達載體的KpnI/XhoI酶切位點之間，即得到pcDNA3.1(+)-CblN(BamH I+EcoR V)； 再以SK-BR-3細胞的cDNA為模板，設計引物擴增得到Grb7 SH2基因，將該Grb7 SH2基因克隆到pGEM-T easy載體中，酶切鑒定及測序證實序列正確后，以BamH I和EcoR v雙酶切將Grb7 SH2基因切出，插入到所述pcDNA3.1(+)-CblN(BamH I+EcoR V)載體的BamH I/EcoR V酶切位點之間； 經BamH I和EcoR v雙酶切鑒定后，對獲得預期大小的插入片段的載體再進行測序證實，命名為pcDNA3.1(+)-Cbl-Grb7(SH2)-RING，即為重組嵌合Cbl泛素連接酶Cbl-Grb7(SH2)-RING真核表達質粒。 |
| 摘要 | 本發(fā)明公開了重組嵌合Cb1泛素連接酶Cb1-Grb7(SH2)-RING真核表達載體的構建方法，所構建表達質粒pcDNA3.1(+)-Cb1-Grb7(SH2)-RING能夠作為抗EGFR或HER2陽性腫瘤的基因藥物。經實驗證明：重組嵌合分子Cb1-Grb7(SH2)-RING真核表達質粒轉染EGFR陽性肺癌細胞A549或HER2陽性乳腺癌細胞系SK-BR-3后，通過促進EGFR或HER2下調，有效地抑制了與EGFR或HER2過度活化有關的細胞增殖，因而具有抗EGFR或HER2陽性腫瘤的用途。 |
| 國際公布 |
