公開(公告)號
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CN1314811C
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公開(公告)日
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2007.05.09
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申請(專利)號
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CN200510042988.9
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申請日期
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2005.07.25
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專利名稱
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重組嵌合分子Cb1-Grb7(SH2)-RING真核表達質粒及抗腫瘤基因藥物用途
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主分類號
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C12N15/79(2006.01)I
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分類號
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C12N15/79(2006.01)I;C12N15/66(2006.01)I;A61K48/00(2006.01)I;A61P35/00(2006.01)I
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分案原申請?zhí)? |
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優(yōu)先權
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申請(專利權)人
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中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學
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發(fā)明(設計)人
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李 霞;張 璟;劉新平;藥立波
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地址
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710032陜西省西安市長樂西路17號
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頒證日
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國際申請
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進入國家日期
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專利代理機構
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西安通大專利代理有限責任公司
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代理人
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李鄭建
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國省代碼
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陜西;61
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主權項
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重組嵌合分子Cbl-Grb7(SH2)-RING真核表達質粒的構建方法,其特征在于: 首先將BamH I和EcoR V引入Cbl N端編碼基因SH2的兩端,獲得CblN(BamH I+EcoRV);將其克隆入pGEM-T easy載體進行測序,測序正確后利用KpnI/XhoI酶切,將酶切片段插入到pcDNA3.1(+)真核表達載體的KpnI/XhoI酶切位點之間,即得到pcDNA3.1(+)-CblN(BamH I+EcoR V); 再以SK-BR-3細胞的cDNA為模板,設計引物擴增得到Grb7 SH2基因,將該Grb7 SH2基因克隆到pGEM-T easy載體中,酶切鑒定及測序證實序列正確后,以BamH I和EcoR v雙酶切將Grb7 SH2基因切出,插入到所述pcDNA3.1(+)-CblN(BamH I+EcoR V)載體的BamH I/EcoR V酶切位點之間; 經BamH I和EcoR v雙酶切鑒定后,對獲得預期大小的插入片段的載體再進行測序證實,命名為pcDNA3.1(+)-Cbl-Grb7(SH2)-RING,即為重組嵌合Cbl泛素連接酶Cbl-Grb7(SH2)-RING真核表達質粒。
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摘要
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本發(fā)明公開了重組嵌合Cb1泛素連接酶Cb1-Grb7(SH2)-RING真核表達載體的構建方法,所構建表達質粒pcDNA3.1(+)-Cb1-Grb7(SH2)-RING能夠作為抗EGFR或HER2陽性腫瘤的基因藥物。經實驗證明:重組嵌合分子Cb1-Grb7(SH2)-RING真核表達質粒轉染EGFR陽性肺癌細胞A549或HER2陽性乳腺癌細胞系SK-BR-3后,通過促進EGFR或HER2下調,有效地抑制了與EGFR或HER2過度活化有關的細胞增殖,因而具有抗EGFR或HER2陽性腫瘤的用途。
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國際公布
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