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羅漢果—羅漢果甙ⅡE,Ⅲ,Ⅴ的測定方法—HPLC

  
方法名稱:
  羅漢果—羅漢果甙ⅡE,Ⅲ,Ⅴ的測定— HPLC
應用范圍:
  本方法適用于羅漢果中羅漢果甙ⅡE,Ⅲ,Ⅴ含量的測定
方法原理:
 本品粉末加甲醇回流提取,經(jīng)液相色譜分離,在203 nm處測定峰面積,外標法計算含量
儀器設備及實驗條件:
 

儀器    Agilent-1100分析型高效液相色譜儀,包括二極管陣列多波長檢測器DAD、四元梯度泵、空脫氣機、7725i 動進樣器、HP化學工作站(美國Agilent公司)

試劑    羅漢果甙ⅡE、Ⅲ和甙Ⅴ對照品(本實驗室自制,TLCRf值、IR、NMR值均與文獻報道一致,液相色譜峰為單峰,純度分別達到98.1 %、98.5 %、98.2 %)

色譜條件    色譜柱:ZORBAX SB-C18柱( 4. 6 mm ×150 mm,5 μm);流動相:乙腈—水(體積比25∶75);流速:1 mL/min;檢測波長:203 nm;柱溫:25 ℃;進樣量:20 μL
試樣制備:
 

對照品溶液制備    分別精密稱取羅漢果甙ⅡE、、V對照品各50 mg,置于50 mL容量瓶中,用流動相乙腈水(體積比25 ∶75)溶液超聲溶解,用時適當稀釋。

    供試品溶液的制備    選取不同時期的新鮮羅漢果適量,破碎、冷凍干燥36 h,碾碎過40目篩,精密稱取1 g樣品,用20 mL甲醇溶解回流提取3 次(2、1、1 h),過濾,合并濾液回收溶劑至干,多次總量加入約20 mL水超聲溶解,溶液過HPD-200大孔吸附樹脂,然后用蒸餾水洗至流出液無色,并以80 %乙醇溶液60 mL洗脫,收集洗脫液,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干,以流動相乙腈—水(體積比25∶75) 溶液少量多次的超聲溶解,并定容至25 mL容量瓶中,用0. 45 μm微孔濾膜過濾,濾液作為供試品備用。
操作步驟:
  分別精密吸取羅漢果甙ⅡE,Ⅲ,Ⅴ對照液以及羅漢果供試品溶液各20 μL,注入液相色譜儀,按上述色譜條件測定峰面積。以外標法計算羅漢果甙ⅡE,Ⅲ,Ⅴ含量。
附件:
  點擊下載 (解壓密碼:quanxiangyun.cn)
備注:
 
參考文獻:
  劉磊等. HPLC法測定不同生長期羅漢果甙ⅡE,Ⅲ,Ⅴ的含量. 廣西植物 .2007,27(4):665~668
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