方法名稱： |
三黃片—大黃素的測定—高效液相色譜法 |
應用范圍： |
本方法采用高效液相色譜法測定三黃片中大黃素的含量。 |
方法原理： |
供試品除去包衣，精密稱定，加無水乙醇加熱回流1h，濾過，取部分續(xù)濾液蒸干，加30%乙醇-鹽酸（10:1)加熱溶解，立即冷卻，用氯仿振搖提取4次，合并氯仿液，置水浴上蒸干，殘渣用無水乙醇-醋酸乙酯（2:1)溶解，搖勻，用濾膜濾過，取續(xù)濾液進入高效液相色譜儀進行色譜分離，用紫外吸收檢測器，于波長254nm處檢測大黃素的吸收值，計算出其含量。 |
試劑： |
1. 甲醇（色譜純) 2. 乙醇 （分析純) 3. 磷酸（分析純) |
儀器設備： |
1 儀器 1.1 高效液相色譜儀 1.2 色譜柱 Hypersil C18色譜柱（150mm×4.6mm, 5μm) 1.3 紫外吸收檢測器 2 色譜條件 2.1 流動相：甲醇 0.1%磷酸溶液=85 15 2.2 檢測波長：254nm 2.3柱溫：室溫 |
試樣制備： |
1. 稱取供試品 取樣品20片，除去糖衣，精密稱定。研細，混勻，取約0.1g，精密稱定。 2. 對照品溶液的制備 精密稱取大黃素適量，加無水乙醇-醋酸乙酯（2:1)制成每1ml含大黃素0.03mg的溶液。 3.供試品溶液的制備 取供試品錐形瓶中，精密加乙醇30ml，密塞，稱定重量，置水浴上加熱回流1h，放冷，用乙醇補足減失的重量，濾過，精密量取續(xù)濾液15ml，置燒瓶中，水浴蒸干，加30%乙醇-鹽酸（10:1)溶液15ml,置水浴上加熱溶解1h，立即冷卻，用氯仿振搖提取4次，合并氯仿液，置水浴上蒸干，殘渣用無水乙醇-醋酸乙酯（2:1)溶解，移置25ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，用0.45um濾膜濾過，取續(xù)濾液為供試品溶液 |
操作步驟： |
1. 標準曲線的繪制 精密量取上述對照品溶液1，2，3，4，5，6ml，分別置25ml容量瓶中,加無水乙醇-醋酸乙酯（2:1)釋釋至刻度,分別精密吸取10μl注入高效液相色譜儀,測定峰面積,以進樣量為橫坐標,峰面積為縱坐標,繪制標準曲線。 按供試品測定方法進行測定，進行線性回歸得標準曲線。 2. 供試品的測定 精密吸取供試品溶液10μL注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測器，于波長254nm處測定大黃素的吸收值，計算出其含量。 |
參考文獻： |
苗明三，李振國.現(xiàn)代實用中藥質量控制技術.北京：人民衛(wèi)生出版社，2000,81 |
